一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法

摘要

本发明公开了一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素(PEB)的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，通过应用藻胆蛋白beta155裂合酶催化藻红胆素与链霉亲和素标记的藻蓝蛋白类脱辅基蛋白共价结合，制备链霉亲和素标记的结合PEB的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；本发明的方法应用生物过程生产藻蓝蛋白类荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法。藻蓝蛋白类荧光蛋白质能应用于食品、保健与医药功能材料领域，特别是应用为生物和医学分子监测领域的荧光探针。

主权项

1. 一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于包括下述步骤：(1)用基因工程方法，将beta155裂合酶基因或其同源基因克隆于表达载体中，得到beta155裂合酶表达质粒；(2)用基因工程方法，将藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因或其同源基因与链霉亲和素基因拼接后克隆于第二个表达载体中，得到链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；(3)用基因工程方法将藻红胆素生物合成酶基因hol和pebB或其同源基因克隆于第三个表达载体中，得到hol和pebB表达质粒；(4)用基因工程方法将藻红胆素生物合成酶基因pebA或其同源基因克隆于第四个表达载体中，得到pebA表达质粒；(5)将beta155裂合酶表达质粒、链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、hol和pebB表达质粒及pebA表达质粒依次转入配套的宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程生产链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质。