一种基于荧光通用引物的多重定量RT-PCR基因表达谱分析方法

摘要

本发明涉及基于荧光通用引物的多重定量RT-PCR基因表达谱分析方法，包括下列步骤：(1)通用引物及上下游嵌合特异引物的引物序列设计，通用引物的长度为20bp，上游通用引物5’端用Fam荧光标记，嵌合特异引物长度为38bp，3’端为特异引物序列段，5’端为通用引物序列段；(2)多重RT-PCR反应过程；(3)测序仪凝胶电泳予以分析检测。本发明适用于10-30个基因/反应的研究特定药物代谢途径或信号传导通路等特定候选基因表达分析，是一种对于定量的、高通量的、经济的基因表达分析简单最佳的多重解决方案。

主权项

1. 一种基于荧光通用引物的多重定量RT-PCR基因表达谱分析方法，其特征在于：包括下列步骤：(1)通用引物及上下游嵌合特异引物的引物序列设计通用引物的长度为20bp，上游通用引物5’端用Fam荧光标记，嵌合特异引物长度为38bp，3’端为特异引物序列段，5’端为通用引物序列段；(2)多重RT-PCR反应过程：a逆转录反应阶段，下游嵌合特异引物逆转录合成目的基因的cDNA第一链；b PCR反应过程，前3个循环，上游嵌合特异引物将通用引物序列加到目的基因DNA片段的两端；PCR反应的余下循环，高浓度的荧光通用引物取代上游嵌合特异引物完成整个PCR反应过程；(3)测序仪凝胶电泳予以分析检测。