木聚糖酶酶活检测方法

摘要

本发明涉及木聚糖酶酶活检测方法，尤其涉及以小麦为底物，检测木聚糖酶酶活的方法。其方案是将小麦去壳粉碎后，过60目筛，木聚糖酶催化小麦所含木聚糖水解生成还原糖，还原糖能将3，5-二硝基水杨酸中的硝基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比色法测定其还原糖生成量来表示酶的活力。该方法使用粉碎的小麦作为检测木聚糖酶活力的底物，相较标准底物，更接近实际应用，有准确的指导意义。

主权项

1. 一种木聚糖酶酶活检测方法，先采用常规方法绘制木糖含量标准曲线，其特征在于，包括以下步骤：(1)底物制备：取小麦去壳粉碎，得小麦粉；(2)待测反应液的制备：称取数份等质量，计为C克的小麦粉，分别加入等量的蒸馏水中，搅匀，制得计为D毫升小麦粉溶液；依次向上述小麦粉溶液中添加木聚糖酶，木聚糖酶添加量从零单位开始，依次增加，制得数份反应液；(3)比色测定：将步骤(2)中的数份反应液均置于40℃恒温水浴锅中，在一段时间后分别取各份反应液中的反应液B毫升，0.05≤B≤D，均加入9倍于B的pH5.3的醋酸钠-醋酸缓冲液和10倍于B的3，5-二硝基水杨酸试剂混合均匀，沸水浴反应10分钟后，冷却，再均加入50倍于B的蒸馏水，以没加木聚糖酶的反应液作为空白对照，用分光光度计测定各反应液的分光度；(4)计算结果：根据所测得的分光度及木糖含量标准曲线，求得各份反应液的B毫升反应液所含有的还原糖量，用下列公式计算各份反应液中的木聚糖酶分解单位质量小麦粉所得还原糖量，其中：n为0，1，2，3，...an表示第n份反应液中的木聚糖酶分解单位质量小麦粉生成的还原糖量，单位mg/g；An表示第n份反应液的B毫升反应液所含有的还原糖量，单位mg；D表示反应液总体积，单位ml；B表示比色测定时所取的反应液体积，单位ml；C表示各份反应液所用小麦粉的质量，单位g。