大肠埃希氏菌K88、K99、987P纤毛亚单位油乳剂疫苗的生产方法

摘要

本发明涉及一种是用于预防仔猪黄痢的大肠埃希氏菌K88、K99、987P纤毛亚单位油乳剂疫苗的生产方法，本发明是用分别生长K88、K99、987P纤毛抗原的大肠埃希氏菌，接种于适宜培养基培养，提取生长于菌体表面的纤毛抗原，与油佐剂混合乳化制成。用于预防由大肠埃希氏菌引起的新生仔猪腹泻病(即仔猪黄痢)。本发明采用新型设备和新的工艺参数，实现了三种纤毛抗原的高效、快速提取，免疫效力比普通铝胶佐剂疫苗高3～5倍。

主权项

1. 一种预防仔猪黄痢的K88、K99、987P纤毛亚单位疫苗的生产方法，其特征在于包括一下几个步骤：1)按发酵罐容积70％(V/V)加入改良Minca液体培养基，同时按培养基0.1％(V/V)加入消泡剂，通入高温蒸汽灭菌30min，待培养基温度降至35～37℃，按3％(V/V)向发酵罐中加入种子培养物，调节培养温度至37℃，调节融氧浓度至35％，培养5～7h分别制备含K88纤毛抗原的大肠埃希氏菌C83549菌株的菌液、含K99纤毛抗原的大肠埃希氏菌C83644菌株的菌液和含987P纤毛抗原的大肠埃希氏菌C83710菌株的菌液；2)各菌株发酵培养菌液经管式离心机10000r/min离心30min，收获的菌泥按0.1g/ml比例重新悬浮于生理盐水中。采用剪切机对在58～65℃对含不同纤毛抗原的大肠埃希氏菌的菌悬液按5000～6000r/min的剪切强度剪切20～25min分别进行各纤毛抗原的提取；3)按每1ml成品苗中，K88纤毛抗原含量≥100个抗原单位、K99纤毛抗原含量≥50个抗原单位、987P纤毛抗原含量≥50个抗原单位，配制混合纤毛液；4)按常规方法制备成油乳剂疫苗。