从无源太空搭载系统中回收微载体上细胞的方法

摘要

本发明涉及从无源太空搭载系统中回收微载体上细胞的方法，经过太空飞行后，返回地面的微载体上的哺乳类动物细胞的状态较差，因此不能直接进行消化处理，这时应进行消化处理前的细胞孵育，即从无源太空搭载系统中返回的装有微载体和细胞的冻存管中抽出培养液，换上太空完全培养基，然后置于5％左右的CO₂、37℃左右孵箱内孵育15-20个小时或在细胞倍增期内孵育，再进行消化处理和单克隆化处理。本发明的方法简便易行，能最大限度地从无源太空搭载系统中的微载体内消化下来太空搭载细胞，尽可能使细胞保持良好的状态，解决了从无源太空搭载系统中返回地面后，从微载体内消化及单克隆细胞的困难。

主权项

1.一种从无源太空搭载系统中回收微载体上细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)从无源太空搭载系统中返回的装有微载体和哺乳类动物细胞的冻存管中抽出培养液，换上太空完全培养基，太空完全培养基为每升中含有789.85毫升DMEM、200毫升进口胎牛血清、含量为0.03克每毫升的谷氨酰胺10毫升和含量为5毫克每毫升的氢化可的松0.15毫升的培养后置于5％CO₂、37℃孵箱内孵育15-20个小时或在哺乳类动物细胞倍增期内孵育；(2)吸出冻存管中的太空完全培养基，然后加入2毫升无血清培养基清洗微载体；(3)待微载体完全沉降后吸出冻存管中的无血清培养基；(4)再向冻存管中加入1毫升的0.25％胰酶和0.2％EDTA的混合液，轻摇2—4分钟，来消化微载体上的细胞；(5)加入2毫升的含有20％血清培养基来中和步骤(4)中的混合液；(6)将冻存管中的溶液颠倒混合，放置冻存管，微载体在管中一边下降，一边从冻存管中吸出上清液，并且将该上清液置于离心管中；(7)再向冻存管中加入3毫升的含有20％血清培养基，颠倒摇动冻存管40—60次，微载体在管中一边下降，一边从冻存管中吸出上清液，并且将该上清液置于步骤(6)所述的离心管中；(8)重复步骤(2)—(7)2至3次，并且将得到的上清液置于步骤(6)所述的离心管中；(9)将上述离心管中的上清液进行离心处理5-8分钟，离心速度为1000-1200rpm，然后在室温下收集细胞沉淀；(10)将收集到的细胞沉淀中加入0.25毫升的含有20％血清培养基，混匀，取0.01毫升计数；(11)根据步骤(10)的计数结果，按照一块96孔板排放20-30个细胞的要求抽取细胞沉淀，并在该细胞沉淀中加入占总体积90％的太空完全培养基和占总体积10％的常规培养该细胞后留存的上清液来稀释后，铺板.