基因捕获载体及建立全基因组突变胚胎干细胞库的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，涉及一种可进行全基因组基因捕获的捕获载体组，并利用该捕获载体组建立突变胚胎干细胞库的方法。本发明中涉及的四个捕获载体可分别捕获细胞中正常表达基因、诱变和捕获正常细胞中不表达基因和胚胎致死基因，从而可以对全基因组基因进行捕获和基因突变，建立覆盖全基因组单基因突变的胚胎干细胞库。

主权项

1、一组用于全基因组基因捕获的捕获载体组，其特征在于四个载体从5’到3’的结构顺序分别为：Trp1：LTR-SA-βgeo-pA-LTR；Trp2：LTR-SA-LacZ-pA-PGKp-Neo-SD-LTR；Trp3：LTR-SA-LacZ-pA-PGKp-Neo-LoxP-IRES-LoxP-SD-LTR；Trp4：LTR-frt-F3-LoxP-Lox511-SA-βgeo-pA-LoxP-Lox511-frt-F3-LTR；其中LTR是长末端重复序列；SA是剪接受体；SD是剪接供体；Neo是新霉素抗性基因；βgeo是β-半乳糖苷酶和新霉素抗性基因融合产物；pA是poly(A)序列；LacZ是β-半乳糖苷酶；PGKp指磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子；IRES为内核糖体进入序列；frt-F3是FLP重组酶(flip recombinase)识别位点；LoxP-Lox511为Cre/lox重组系统识别位点。