一种鉴定转基因植物拷贝数的简单新方法

摘要

本发明提供了一种利用普通PCR循环仪和植物种内特异单拷贝基因为内标实现转基因植物拷贝数鉴定的简单新方法。其特征在于首先提取待测样品幼嫩叶片的总DNA，将所有样品的DNA浓度调整一致。设计目标基因和内标基因的特异引物，在PCR分子检测的基础上进一步确定最佳PCR循环数。然后做目标基因和内标基因在相同循环数下的平行PCR及琼脂糖电泳，最后根据二者在电泳图像中的光密度值的比值来确定目标基因的拷贝数。本发明的积极效果在于：①有益于转基因植物育种中筛选稳定表达的转基因植株；②操作简单、耗时短、费用低廉、安全、准确；③结合了转基因植物的PCR分子检测，任何一个做转基因植物PCR分子检测的实验室均可实现批量检测而不增加实验设备和难度。

主权项

1. 本发明涉及了一种鉴定转基因植物拷贝数的简单新方法。实验过程首先采集待检测样品的幼嫩叶片，提取总DNA。将所有样品的DNA浓度调整一致。设计待测目标基因和内标基因的特异引物，在PCR分子检测的基础上进一步确定最佳PCR循环数。然后做目标基因和内标基因在相同循环数下的平行PCR及琼脂糖电泳，最后根据二者在电泳图像中的光密度值的比值来确定目标基因的拷贝数。数字化电泳图像的光密度值计算借助于MATLAB软件完成。