用作医疗和功能性食品的鹿副产物胶原和功能性胶原蛋白制备方法

摘要

本发明涉及以鹿副产物(鹿骨、鹿皮)为原料制备活性胶原和功能性胶原蛋白的方法。本发明采用微粉碎和高压均质对原料进行处理，采用酸-酶法提取鹿胶原，经水洗和干燥得到纯品胶原。采用定位酶解制备活性胶原蛋白，利用膜分离技术、脱盐、浓缩和干燥技术，得到功能性胶原蛋白。本发明制备的胶原分子量＞100KDa，具有生物活性，制备的胶原蛋白分子量＜5KDa，具有抗疲劳和调节免疫力功能，采用的方法成本低廉，适合工业化生产，生产效率高，产品可控的特点。可应用于生物材料、医药、保健食品和化妆品等领域。

主权项

1、具有生物活性的鹿胶原和具有抗疲劳和调节免疫力功能的鹿胶原蛋白的制备方法，其特征在于它的制备过程为：a. 原料预处理原料为鹿(梅花鹿、马鹿、梅马杂交鹿、赤鹿和驯鹿等)副产物，包括鹿骨、鹿皮等。预处理的关键技术为将原料经微粉碎，使物料粒度<0.2mm。b. 胶原的提取所有操作都在40℃条件以下进行。原料经微粉碎，浸入10-15倍体积的0.5M醋酸溶液中，经30-100Mpa高压均质，调节pH值至2.0～3.0，加入0.5％-1％胃蛋白酶消化48h，调节pH值至7，去除胃蛋白酶，消化液离心(35,000g，45min)，收集上清液。向溶液中缓慢加入固体NaCl使最终浓度为4.1％，连续缓慢搅拌12hr。沉淀离心(7000g，45min)后收集，重新溶解于0.5M醋酸溶液，离心(35,000g，45min)除去沉淀，在相同溶液透析2d，每天换透析液2次。直至在透析液中滴加AgNO3溶液无沉淀产生，将透析后溶液冷冻干燥，至此可以得到高纯度的胶原。c. 胶原蛋白的制备将均质原料的温度调整到50℃～65℃，加入酸或碱使其pH值在8.0～8.5，加入占原料质量3％～6％的蛋白酶A进行水解且不断搅拌，加入碱使反应液的pH值维持在8.0～8.5之间，水解1～5h。水解结束后加入酸调节pH值至4.2～4.6，升温灭酶活，冷却至室温后离心20～40min，取上清液。d. 膜分离采用1-3万分子量的超滤膜，对酶解产物进行膜分离，获得分子量<5KDa的胶原蛋白，收集膜滤出液。e. 脱盐将阴阳离子交换树脂装柱，取膜滤出液酶解产物以8～12倍柱体积/小时的流速通过阳、阴离子交换树脂，得脱盐精制的胶原蛋白，即成品。也可对其进行浓缩或干燥。