捻转血矛线虫微粒体氨肽酶基因的获得方法及应用

摘要

本发明提供一种获取捻转血矛线虫(H.contortus)微粒体氨肽酶基因的方法，通过总RNA的抽提和H11 cDNA序列的克隆，H11 cDNA序列同源性比较及氨基酸序列分析，H11基因组序列的克隆及结构分析。本发明参考H11基因的cDNA序列，可方便、完整、准确地获得H11的基因组序列，可利用H11的基因组序列分析H11 mRNA的转录特征，为H.contortus的疫苗研制提供了可靠的背景资料和素材。本发明提供的捻转血矛线虫微粒体氨肽酶基因可在利用重组蛋白制备亚单位疫苗中的应用。

主权项

1. 一种获取捻转血矛线虫微粒体氨肽酶基因的方法，所述捻转血矛线虫命名为H.contortus，其特征在于通过以下技术方案实现：(1)H. contortus浙江株总RNA的抽提和H11 cDNA序列的克隆所述的H. contortus浙江株总RNA的抽提和H11 cDNA序列的克隆：参照Smith 1997年发表的H.contortus H11基因序列设计引物，见SEQ NO 1和SEQ NO 2，以H.contortus浙江株的总RNA为模板，进行RT-PCR扩增，将PCR产物与PUCm-T载体连接后，转化DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆，测序见SEQ NO 3；(2)H11 cDNA序列同源性比较及氨基酸序列分析H11 cDNA序列同源性比较及氨基酸序列分析：利用生物软件DNAStar对获得的H11基因进行基本的特征分析，并与Smith等克隆的H11进行同源性比较，见SEQ NO 4；(3)H11基因组序列的克隆及结构分析H11基因组序列的克隆及结构分析：利用DNAStar软件分析H11及其同源基因T07F10.1a、CBG09515，根据T07F10.1a、CBG09515的内含子、外显子分布特点，参考获得的H11 cDNA序列，设计引物，见SEQ NO 5和SEQ NO6，以H.contortus的基因组DNA为模板，进行长距离PCR扩增，获得H11基因的部分基因组序列，测序。