利用内源性血管生成抑制因子Arresten基因制备蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种基因重组、表达技术，具体为一种利用内源性血管生成抑制因子Arresten基因制备蛋白的方法。解决了现有技术中存在的利用人体中的Arresten基因制备具有抑制肿瘤血管生成的蛋白质过程中存在的效率低下的问题。步骤包括，从人体中提取总RNA，加入上、下游引物，RT-PCR反转录扩增得到Arresten基因的DNA，再取质粒载体pBV220双酶切后与RT-PCR扩增产物Arresten DNA双酶切后连接，得到连接反应产物pBV220-Arr，最后将产物转化入到宿主大肠杆菌中表达，得到Arresten蛋白。与现有技术相比，本发明使用一种同时作为连接载体和表达载体的质粒pBV220，既简单又经济，节省了成本，而且表达效果非常好，提高了合成的效率。为所需目的蛋白的合成提供了一种新途径。

主权项

1、一种利用内源性血管生成抑制因子Arresten基因制备蛋白的方法，步骤包括，从人体中提取总RNA，加入上、下游引物，RT-PCR反转录扩增得到Arresten基因的DNA，再取质粒载体双酶切后与RT-PCR扩增产物Arresten DNA双酶切后连接，得到连接反应产物，最后将产物转化入到宿主大肠杆菌中表达，得到Arresten蛋白，连接及表达载体所用质粒为pBV220，载体pBV220与目的ArrestenDNA的摩尔数比：1：1～1：3，在15～18℃连接，时间8～10小时，得到连接反应产物pBV220-Arr，其特征在于：大肠杆菌表达产物以包涵体存在，包涵体的洗涤和分离使用2mol/L尿素与2％ Triton X-100洗涤，上游引物5′—GCCGAATTCTCTGTTGATCACGGC  3′下游引物5′—GCGGATCCTATGTTCTTCTC  3′。