| 发明名称 |
分泌表达重组人表皮生长因子的大肠杆菌表达系统 |
| 摘要 |
本发明提供信号肽基因phoAspL10、表达质粒pBL10EGF、用表达质粒pBL10EGF转化的大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞及从中筛选出的工程菌株BE-2。进一步提供制备rhEGF的方法，即化学合成全新设计的phoAspL10基因及其与hEGF的串联基因，并以pBLGlu2为起始质粒构建表达质粒pBL10EGF，进而构建工程菌株BE-2，该菌株经发酵培养，直接分泌表达rhEGF至培养基中，分泌表达量达到384mg/l，分离纯化后，产品纯度大于95％，比活性大于1.0×10<sup>6</sup>IU/mg蛋白。本发明方法特别是采用特温敏的P<sub>L</sub>强启动子串联全新设计的phoAspL10来表达rhEGF，使表达产物直接分泌至培养基中，而非在胞内形成包涵体或是将蛋白表达至细菌的周质中。产品rhEGF保留了天然的空间构象，生物活性高，不需要再经过蛋白复性。 |
| 申请公布号 |
CN100489096C |
申请公布日期 |
2009.05.20 |
| 申请号 |
CN200510025289.3 |
申请日期 |
2005.04.21 |
| 申请人 |
甘人宝;钱悦;朱俊;冯宝山;丁红珍;张倩;叶勤;张海毅 |
发明人 |
甘人宝;钱悦;朱俊;冯宝山;丁红珍;张倩;叶勤;张海毅 |
| 分类号 |
C12N15/11(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/11(2006.01)I |
| 代理机构 |
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代理人 |
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| 主权项 |
1. 信号肽基因phoAspL10，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：1所示序列。 |
| 地址 |
200032上海市宛平南路255弄34号2801室 |
