基于片上PCR的多通道表面等离子共振影像传感器的检测方法

摘要

本发明涉及一种基于片上PCR的多通道表面等离子共振影像传感器的检测方法。该传感器同时具有PCR扩增SPR检测功能。本发明的有益效果有以下四个特点：(a)可以一次完成多个样品的检测；(b)可以一次完成同一样品的不同特征的检测；c)在多通道中设置参考通道，消除非特异性响应的影响；(d)由于具备PCR扩增功能，所以可以对低浓度的生物分子进行检测。

主权项

1. 一种基于片上PCR的多通道表面等离子共振影像传感器的检测方法，其特征在于它包括下述步骤：1)先向A、B、C三个通道同时通入摩尔比为1∶9的生物素化硫醇衍生物和OH根硫醇稀释液的混合物磷酸盐PBS缓冲液，反应16—30小时，在各通道表面生成紧密覆盖的自组装单分子膜SAM，再用PBS缓冲液清洗；2)然后在各通道顺序通入磷酸盐PBS缓冲液、浓度足够高的链酶抗生物素Streptavidin，反应5—20分钟、磷酸盐PBS缓冲液，同时实时检测A、B通道的共振角；3)计算反应前后共振角的差值，计算出表面灵敏度；4)用磷酸盐PBS缓冲液清洗三个通道，再将含有大鼠肝脏f蛋白基因探针的磷酸盐PBS缓冲液通入C通道，完成探针分子的固定；5)通入缓冲液PBS清洗C通道，再用纯净水对三个通道进行清洗，然后同时向三个通道中依次通入纯净水和乙二醇，计算各个通道在通入纯净水和乙二醇时的共振角的差值，计算出体灵敏度和KC；6)使用蠕动泵将反应物注入PCR扩增反应池，反应体积约为20μl，PCR扩增样品为大鼠肝脏f蛋白基因，浓度为1.3μg/μl，反应缓冲液中含有上游、下游引物各20pmol、Taq酶1.25u及dNTP各0.2mmol；7)将反应物的温度依次稳定在95℃、55℃、72℃，并进行30个温度循环，达到DNA扩增的目的；8)在向共振SPR样品池通入待测样液进行检测前，应先通入共振PBS对SPR样品池各通道进行清洗；9)使用蠕动泵将PCR反应池中的扩增产物注入共振SPR样品池，并控制杂交温度，实时检测各通道共振角；10)求得任意时刻t各通道的响应，以PBS的共振角为基准，分别求出A、B、C三个通道的共振角变化量ΔθA(t)、ΔθB(t)、ΔθC(t)，根据求出的参数就可以求出C通道的特异性动态响应曲线。