三聚氰胺与载体蛋白偶联产物和三聚氰胺抗体的制备方法及用途

摘要

本发明公开了一种三聚氰胺与载体蛋白偶联产物和三聚氰胺抗体的制备方法及用途。载体蛋白与三聚氰胺偶联产物作为人工抗原应用于三聚氰胺检测的免疫学方法；偶联产物免疫动物，制备用于三聚氰胺检测的抗体；偶联产物免疫的BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合，经阳性杂交瘤细胞筛选、细胞克隆获得能稳定传代并分泌抗三聚氰胺特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，并制备腹水单抗。利用制备的单抗建立了对三聚氰胺具有高度特异性、灵敏性和精确性的直接竞争ELISA方法及免疫胶体金试纸条。本发明提供的三聚氰胺与载体蛋白的偶联及三聚氰胺抗体的制备方法，为快速检测食品中三聚氰胺类物质残留提供服务。

主权项

1. 一种三聚氰胺与载体蛋白偶联产物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：a)三聚氰胺3-1000mg溶于1-10mL体积比为1∶1∶2的二甲基甲酰胺/1，4-二氧六环/0.1M pH7.2PBS溶液中；b)2-900mg载体蛋白溶于1-10mL0.1M pH7.2PBS中；c)将上述三聚氰胺溶液缓慢加入载体蛋白溶液中，再逐滴加入10-1000uL25％戊二醛溶液，加毕在4-35℃搅拌反应1-36h，合成三聚氰胺-载体蛋白偶联产物；d)三聚氰胺-载体蛋白偶联产物放入透析袋中，用0.01M pH7.2的磷酸盐缓冲液在4℃透析1-3天；e)透析后的三聚氰胺-载体蛋白偶联产物进行紫外扫描，分析鉴定偶联产物及浓度测定，分装后于-20℃冰箱保存备用。