一种发酵生产克拉维酸的方法

摘要

本发明属于生物医药领域，涉及一种发酵生产克拉维酸的方法。该方法以棒状链霉菌为出发菌，主要包括斜面菌种的制备、种子液的制备以及发酵工艺控制等步骤。本发明以棉籽粉和淀粉为发酵培养基的主要氮源和碳源并通过调控发酵工艺，使克拉维酸的生产成本大大降低，发酵效价提高，解决了现有技术中存在的生产成本高，发酵效价低的缺点。

主权项

1. 一种利用棒状链霉菌发酵生产克拉维酸的方法，其工艺步骤如下：(1)斜面菌种的制备：将冻干的棒状链霉菌菌种用无菌水稀释后涂布装有固体培养基的斜面上，温度28℃，湿度40—60％，培养10—12天，产孢后加无菌水制成孢子悬浮液；(2)摇瓶种子液制备：将斜面孢子接种摇瓶种子培养基，250rpm，温度28℃，湿度40—60％，培养20—40小时；(3)种子液的制备：将(2)步骤中培养好的摇瓶种子接种到种子罐中，接种量为0.5-2％，在温度28℃，搅拌转速300—500转/分，通气量0.5VVM-1.0VVM，罐压0.05-0.07MPa的条件下，培养20—40小时；(4)发酵培养：将(3)步骤中培养好的菌种接种到发酵罐中，接种量为5—15％(V/V)，在温度28℃，搅拌转速300—600转/分，通气量0.5VVM-1.2VVM，罐压0.05—0.08MPa，pH为6.5-7.5，补入营养物质的条件下，培养90—120小时；其中：所述的(1)步骤中所用培养基成分和含量为葡萄糖4-10g/L、麦芽提取物4-10g/L、酵母膏4-10g/L、琼脂20-25g/L，pH为6.5-7.5；所述的(2)步骤中所用培养基成分和含量为蛋白胨3-10g/L、麦芽提取物3-10g/L、酵母膏3-10g/L，pH为6.5-7.5；所述的(3)步骤中所用培养基成分和含量为甘油10-20g/L、棉籽粉20-30g/L、麦芽提取物5-15g/L、消泡剂2-4g/L，pH为6.5-7.5；所述的(4)步骤中所用培养基成分和含量为甘油10-20g/L、棉籽粉40-60g/L、淀粉10-20g/L、KH2PO41.0-3.5g/L、MgSO4·7H2O0.5-2.5g/L、FeSO4·7H2O0.005-0.035g/L、MnCl2·4H2O0.005-0.015g/L、ZnSO4·7H2O0.005-0.045g/L、消泡剂2-5g/L，pH为6.5-7.5。