月季耐盐株系的离体快速筛选方法

摘要

本发明公开了一种月季耐盐株系的离体快速筛选方法，属农业生物技术领域。本发明由初始外植体的选择与灭菌、萌芽诱导、增殖培养、增殖苗的持续继代、叶片直接再生、叶片间接再生、物理诱变、诱变恢复培养、耐盐株系的离体快速筛选、耐盐株系的快速增殖与再筛选、恢复培养及壮苗、生根、移栽13个步骤组成。本发明利用月季叶片愈伤组织或直接再生的不定芽作为处理材料，重点研究了耐盐突变株系的离体筛选技术、继代增殖、壮苗与生根培养四个关键环节。其方法重复性好，且能达到有效剔除假阳性植株，获得具稳定遗传的耐盐性植株，其耐盐性筛选的平均总成活率约达18％，比对照1约提高16％，比对照2约提高18％，大幅提高了耐盐性筛选效率。

主权项

1. 一种月季耐盐株系的离体快速筛选方法，其特征在于，按以下步骤进行：(1)初始外植体的选择与灭菌，选择生长健壮、无病虫害危害及病毒症状表现的当年生新枝，剪成每段含1～2个侧芽的茎段，剪去叶片后放入含适量洗衣粉的洗衣粉水中浸泡3～5min，自来水清洗干净，在0.1～0.2％的氯化汞溶液中处理20～25min，1％～2％的次氯酸钠溶液中处理20～25min，无菌水洗3～4次后，进行萌芽诱导；(2)萌芽诱导，在无菌条件下，将上述茎段两头各切去少许茎秆后接入下列萌芽培养基中培养，在温度为23℃±2℃，光照时间为10～12h/d，光照强度为2000～3000Lx的环境条件下，培养15～20d；MS基本培养液6-苄基氨基嘌呤 0.1～0.5mg/L萘乙酸 0.1～0.3mg/L蔗糖 20～30g/L琼脂 5.5～6.0g/L