干酪乳杆菌Zhang高密度培养方法、使用它们制备冻干菌粉的方法与所得到的冻干菌粉及其用途

摘要

本发明涉及一株具有益生功效的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei Zhang)的高密度发酵技术，包括增殖培养基和发酵工艺条件优化控制，和该菌株的高活力冻干菌粉的制备技术。通过本发明可以得到10¹¹cfu/mL以上活菌数的干酪乳杆菌的冻干菌粉，能够直接应用于该菌株益生菌发酵剂和益生菌制剂的制备和应用。

主权项

1、一种干酪乳杆菌Zhang的高密度培养方法，其特征在于该方法步骤如下：a. 菌种活化：将冷冻保存的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei Zhang)CGMCC 1697接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养18-24小时，如此传代培养1-2次得到所述的活化干酪乳杆菌Zhang菌种；b. 培养基的配制：首先，分别称取下述原料：60-90重量份一水合葡萄糖、8-12重量份酵母粉、8-12重量份大豆蛋白胨、3.0-3.5重量份磷酸氢二钾、13-15重量份乙酸钠、2.0-2.5重量份柠檬酸钠、0.8-1.0重量份MgSO4.7H2O、0.04-0.08重量份MnSO4.5H2O与0.8-1.0重量份吐温-80；然后，将上述原料溶于1000重量份水中，搅拌均匀，再使用中和剂将其pH值调节到6.4-6.6，再在温度120-122℃下灭菌15分钟，这样得到所述的培养基；c. 菌种发酵液的制备：以使用所述的培养基重量计，按照1-3重量％将步骤a)得到的活化干酪乳杆菌Zhang菌种接种于在步骤b)得到的所述培养基中，在温度37℃下培养8-10小时得到干酪乳杆菌Zhang菌种发酵液；d. 发酵：以使用所述的培养基重量计，按照4-10重量％将步骤c)得到的所述干酪乳杆菌Zhang菌种发酵液接种于在步骤b)得到的所述培养基中，在温度35-37℃下进行发酵8-16小时，在所述的发酵过程中通过流加中和剂将该发酵介质的pH保持在5.8-6.5，同时保持微通氧或厌氧的条件；e. 终止发酵：所述发酵介质的pH不再降低与中和剂流加停止时，就终止发酵，于是得到所述的干酪乳杆菌Zhang活菌数达1010cfu/ml以上的干酪乳杆菌高密度发酵液。