一种适用于盐酸西布曲明的免疫原合成方法

摘要

一种适用于盐酸西布曲明的免疫原合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以盐酸西布曲明代谢物双去甲基盐酸西布曲明M2为半抗原，用混合酸酐法将其与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外扫描仪测定偶联物的偶联比。本发明是一种季胺类减肥药物的通用人工抗原的合成方法，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了必需的人工抗原，可以满足国内对其研究的需要。

主权项

1. 一种适用于盐酸西布曲明的免疫原合成方法，其特征是以盐酸西布曲明代谢物双去甲基盐酸西布曲明M2为半抗原，用混合酸酐法将其与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外扫描仪测定偶联物的偶联比；(1)人工抗原的合成：双去甲基盐酸西布曲明、三丁胺、氯甲酸异丁酯、牛血清白蛋白以摩尔比为44∶53∶53∶1的比例反应，双去甲基盐酸西布曲明溶于丁二酸酐的吡啶溶液中，常温下避光搅拌23小时后用氮气吹干，再加N，N-二甲基甲酰胺DMF：1，4-二氧六环体积比1∶1的溶剂溶解后，加入三丁胺在冰水中搅拌，最后加入氯甲酸异丁酯室温搅拌反应1h，为A液；牛血清白蛋白溶于硼酸纳缓冲溶液中后逐滴加入上述A液中，室温下搅拌反应24h，即得人工抗原混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；将人工抗原混合液移入透析袋中，用2×2L的0.01M的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液和2×2L的去离子水透析3天，最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，即得到人工抗原：双去甲基盐酸西布曲明-牛血清蛋白；(2)人工抗原的鉴定：双去甲基盐酸西布曲明-牛血清蛋白采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外扫描仪测定其偶联比。