制备链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的方法

摘要

本发明公开了一种分子设计新型链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的方法，通过应用藻胆蛋白alpha亚基裂合酶催化藻蓝胆素与链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白alpha亚基类脱辅基蛋白共价结合，制备链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质。本发明的方法应用生物过程生产链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白类alpha亚基荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法。链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质能应用于生物学和医药功能材料领域，特别是应用为生物学和医学检测领域的荧光探针。

主权项

1. 一种制备链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的方法，其特征在于包括下述步骤：(1)采用基因工程方法，将alpha亚基裂合酶基因或其同源基因克隆于表达载体中，得到alpha亚基裂合酶表达质粒；(2)用基因工程方法将链霉亲和素基因和藻红蓝蛋白alpha亚基类脱辅基蛋白基因或其同源基因克隆于第二个表达载体中，得到链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；(3)用基因工程方法将PCB生物合成酶基因hol和pcyA或其同源基因同时克隆于第三个表达载体中或分别克隆于第三、第四个表达载体，得到PCB合成质粒；(4)将beta裂合酶表达质粒、链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、PCB生物合成酶质粒依次转入配套的宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，将该工程菌发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质。