发明名称 |
一种永生化猪肝细胞大规模培养的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种永生化猪肝细胞大规模培养的方法,包括将收集的永生化猪肝细胞接种至转瓶中,经三层转瓶培养系统中旋转培养,用1.5-2.0%浓度的海藻酸钠溶液调整永生化猪肝细胞的浓度为1-2.5×10<sup>6</sup>个/mL;再调整浓度后得到的永生化猪肝细胞,采用一步法海藻酸-壳聚糖制备永生化猪肝细胞微囊;本发明还公开了一种微囊化永生化猪肝细胞。本发明提供的微囊化永生化猪肝细胞,可作为肝细胞源应用于生物型人工肝或肝细胞移植,本发明制备出的抗HCMV gBn1抗体,其优点为特异性强、灵敏度高。 |
申请公布号 |
CN101392235A |
申请公布日期 |
2009.03.25 |
申请号 |
CN200810121994.7 |
申请日期 |
2008.11.06 |
申请人 |
浙江大学 |
发明人 |
李兰娟;潘小平;杜维波;喻成波;吕国良;虞晓鹏;章益民 |
分类号 |
C12N5/06(2006.01)I;A61L27/38(2006.01)I;A61F2/02(2006.01)I |
主分类号 |
C12N5/06(2006.01)I |
代理机构 |
杭州中成专利事务所有限公司 |
代理人 |
唐银益 |
主权项 |
1、一种永生化猪肝细胞大规模培养的方法,其特征依次包括以下步骤:(1)将收集的永生化猪肝细胞接种至含有10%胎牛血清的180-250mlDMEM的Bellco转瓶中,置于37℃、5%CO2的3L三层转瓶培养系统中旋转培养,转速为1转/分;待细胞长满汇合后,永生化猪肝细胞经过消化、收集、离心、弃上清后,制成细胞悬液,计数细胞活率;用1.5-2.0%浓度的海藻酸钠溶液调整永生化猪肝细胞的浓度为1-2.5×106个/mL,冰浴中备用;(2)在无菌环境下进行,用步骤(1)中调整浓度后得到的永生化猪肝细胞,采用一步法海藻酸-壳聚糖制备永生化猪肝细胞微囊;将永生化猪肝细胞微囊转移至Bellco转瓶中,并加入含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养液180-250ml,置于37℃、5%CO2的3L三层转瓶培养系统中旋转培养,转速为1转/分;每间隔2-4天,用100-200目的细胞筛网过滤培养中的微囊细胞,更换培养基后继续培养;直至培养14天后,收集微囊化永生化猪肝细胞。 |
地址 |
310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |