发明名称 | 一种周质分泌融合表达型前T载体及其制备与应用 | ||
摘要 | 本发明提供了一种周质分泌融合表达型前T载体,由如下方法制备得到:(1)构建编码BspTI-GSGSG-HHHHHH-XcmI-Amp<sup>r</sup>-XcmI-HindIII的DNA1片段;(2)定点突变pET39质粒中LacI基因内部的三个XcmI位点,在编码氨基酸序列不变的情况下,改变DNA序列,使XcmI识别位点丧失,得到定点突变消除XcmI位点的pET39’;(3)利用BspTI和HindIII将DNA1定向重组于pET39’中,得到所述周质分泌融合表达型前T载体。本发明除了使用XcmI制备线形T载体外,不需要用其它限制性内切酶,一步法构建融合表达基因工程菌,为大量制备活性肽工程菌库提供了可行的技术方法。 | ||
申请公布号 | CN101381739A | 申请公布日期 | 2009.03.11 |
申请号 | CN200710071214.8 | 申请日期 | 2007.09.06 |
申请人 | 浙江工业大学 | 发明人 | 林陈水;于真真;杨丹燕;许明;任慧颖 |
分类号 | C12N15/63(2006.01)I | 主分类号 | C12N15/63(2006.01)I |
代理机构 | 杭州天正专利事务所有限公司 | 代理人 | 黄美娟;袁木棋 |
主权项 | 1. 一种周质分泌融合表达型前T载体,由如下方法制备得到:(1)构建编码BspTI-GSGSG-HHHHHH-XcmI-Ampr-XcmI-HindIII的DNA片段——DNA1;(2)定点突变pET39质粒中LacI基因内部的三个XcmI位点,在编码氨基酸序列不变的情况下,改变DNA序列,使XcmI识别位点丧失,得到定点突变消除XcmI位点的pET39’;(3)利用BspTI和HindIII将DNA1定向重组于pET39’中,得到所述周质分泌融合表达型前T载体。 | ||
地址 | 310014浙江省杭州市下城区朝晖六区 |