产单端孢霉烯族毒素真菌环介导等温扩增快速检测方法

摘要

本发明涉及一种产单端孢霉烯族毒素真菌环介导等温扩增快速检测方法。其中的试剂包括环介导等温扩增反应液、Bst DNA聚合酶、显色剂；反应液含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、上游内引物5-AGACTGTGGCCGACTTGCAAC-CTTCCCACCTTCACACGG-3、下游内引物5-TGAAAGCGGACGGGACTTTAGG-GGCATTCTGAGTAGCGACAG-3、上游外引物5-GCCAAGCCAGCTTATCGC-3、下游外引物5-CAGGTCTTGAGCTGACTGAG-3和甜菜碱；检测产单端孢霉烯族毒素真菌的方法包括真菌DNA的提取、产单端孢霉烯族毒素真菌的环介导等温扩增、显色检测。本发明的特点是快速、特异性强、灵敏度高而且成本低。

主权项

1. 环介导等温扩增检测产单端孢霉烯族毒素真菌的试剂，其特征是该试剂包括(1)-(4)：(1)环介导等温扩增反应液：包括10×Thermopol反应缓冲液、1.0—1.4mmol/L dNTP、4—8mmol/L硫酸镁(MgSO4)、0.8—1.6μmol/L上游引内物(FIP)、0.8—1.6μmol/L下游内引物(BIP)、0.2—0.3μmol/L上游外引物(F3)、0.2—0.3μmol/L下游外引物(B3)和1—1.5mol/L甜菜碱；其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷—盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X—100；其中上游内引物:5-AGACTGTGGCCGACTTGCAAC-CTTCCCACCTTCACACGG-3；下游内引物:5-TGAAAGCGGACGGGACTTTAGG-GGCATTCTGAGTAGCGACAG-3；上游外引物:5-GCCAAGCCAGCTTATCGC-3；下游外引物:5-CAGGTCTTGAGCTGACTGAG-3；(2)UNG酶：1U/μL；(3)Bst DNA聚合酶：8U/μL；(4)显色剂：为10％的荧光染料SYBR GREEN I或者DNAGreen。