用于提高斑贝链霉菌黄霉素产量的方法及菌株

摘要

本发明属于工业微生物分子育种领域，具体地说属于利用分子生物学手段提高斑贝链霉菌黄霉素产量的方法及其高产菌株的选育。本发明的方法包括：建立高效的大肠杆菌-斑贝链霉菌属间接合转移系统；利用通用引物从斑贝链霉菌基因组DNA中将含有nsdA同源基因的片段克隆下来，得到含有nsdA同源基因片段的重组载体；构建nsdA基因被破坏了的重组载体；将此载体转移到斑贝链霉菌中；通过抗性筛选得到nsdA同源基因被破坏的斑贝链霉菌菌株；对斑贝链霉菌菌株进行黄霉素发酵测定，得到黄霉素高产菌株。所述斑贝链霉菌保藏于CGMCC。本发明解决了现有技术存在的缺陷，提供了利用基因工程手段改造斑贝链霉菌及提高黄霉素产量的新途径。

主权项

1. 一种提高斑贝链霉菌黄霉素产量的方法，其步骤是：(a)建立高效的大肠杆菌-斑贝链霉菌接合转移系统；(b)利用通用引物从斑贝链霉菌基因组DNA中扩增nsdA同源基因片段，得到含有nsdA基因片段的重组载体；(c)构建nsdA基因被破坏了的重组载体；(d)通过接合转移将(c)步骤得到的重组载体转移到斑贝链霉菌中；(e)抗性筛选得到nsdA基因被破坏了的斑贝链霉菌菌株；(f)PCR验证(e)步骤得到的斑贝链霉菌菌株；(g)测定(f)步骤得到的斑贝链霉菌菌株的产抗生素的能力，得到黄霉素高产的斑贝链霉菌菌株。