发明名称 |
实时荧光定量RT-PCR技术检测人前列腺癌微小转移试剂盒 |
摘要 |
本发明涉及一种检测人前列腺癌微小转移的试剂盒,公开了一种应用实时荧光定量RT-PCR技术检测人前列腺癌微小转移试剂盒的技术方案,主要涵概下列步骤:红细胞裂解法分离人外周血单个核细胞,Trizol试剂提取单个核细胞总RNA,用M-MLV反转录酶将单个核细胞RNA反转录为cDNA第一链,TaqMan探针法进行荧光实时定量RT-PCR的检测。本发明的有益效果:本方法采用了Taqman探针荧光实时定量RT-PCR技术,大大提高了PSA和PSMA mRNA检测的灵敏度和特异性,有效克服了常规RT-PCR扩增出现假阳性结果的缺点,其灵敏度可以达到检测10<sup>7</sup>个单个核细胞中存在的一个前列腺细胞。本专利建立的检测方法、设计的引物、探针以及对临床样品的检测结果,为荧光实时定量PCR检测试剂盒的开发提供了可靠的依据。 |
申请公布号 |
CN100468041C |
申请公布日期 |
2009.03.11 |
申请号 |
CN200610015640.5 |
申请日期 |
2006.09.14 |
申请人 |
南开大学 |
发明人 |
张琚;石建党;张立国;杨睿;符蓉;杜小玲;王克明;徐勇;强万明 |
分类号 |
G01N21/00(2006.01)I;G01N33/48(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
G01N21/00(2006.01)I |
代理机构 |
天津佳盟知识产权代理有限公司 |
代理人 |
侯 力 |
主权项 |
1. 一种实时荧光定量RT-PCR技术检测人前列腺癌微小转移试剂盒,包含红细胞裂解液、RNA提取试剂、RT反应液、M-MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、PCR反应液、Taq酶、标准品和对照品;其特征在于:RNA提取试剂包括RNA萃取试剂、RNA洗涤液、UNIQ-10柱和DEPC-H2O,RT反应液包括DEPC-H2O、M-MLV RT缓冲液、随机引物N6和dNTPs,PCR反应液包括PCR缓冲液、MgCl2和dNTPs,检测用上下游引物和荧光探针;检测用上游引物和下游引物:PSA上游引物序列为:5’-CAG TCT GCG GCG GTG TT-3’PSA下游引物序列为:5’-GCA AGA TCA CGC TTT TGT TCC T-3’PSMA上游引物为:5’-AAC TGG ACC CCA GGT CTG GA-3’PSMA下游引物为:5’-GAG GAT TTT ATA AAC CAC CCG AA-3’GAPDH上游引物为:5’-GAA GGT GAA GGT CGG AGT C-3’GAPDH下游引物为:5’-GAA GAT GGT GAT GGG ATT TC-3’荧光探针序列:PSA荧光探针序列为:5’-FAM-CCC CAG TGG GTC CTC ACA GCT GC-TAMRA-3’PSMA荧光探针序列为:5’-FAM-CTG CAG GGC TGA TAA GCG AGG CA-TAMRA-3’GAPDH荧光探针序列为:5’-FAM-CAA GCT TCC CGT TCT CAG CC-TAMRA-3’。 |
地址 |
300071天津市南开区卫津路94号行政楼605 |