菜豆荚斑驳病毒荧光定量RT-PCR试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及一种菜豆荚斑驳病毒荧光定量RT-PCR试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括逆转录酶、RNA酶抑制剂、热启动Taq DNA聚合酶、荧光定量反应液、2×Buffer、无RNA酶的灭菌双蒸水和阳性对照。本发明是以菜豆荚斑驳病毒外壳蛋白CP基因的保守片段为靶目标，设计特异性引物和TaqMan-MGB荧光探针，利用荧光定量RT-PCR技术检测菜豆荚斑驳病毒，不仅具有灵敏度高、特异性强、快速简便和准确可靠的优点，而且无需PCR后处理步骤，能有效防止交叉污染和假阳性，适合于进出境植物检疫、引种及农业生产上菜豆荚斑驳病毒的快速检测诊断，同时可用于菜豆荚斑驳病毒病疫情的实时监控和预警预报，应用前景广泛。

主权项

1、一种菜豆荚斑驳病毒荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：1)逆转录酶：200U/μL；2)RNA酶抑制剂：40U/μL；3)热启动Taq DNA聚合酶：5U/μL；4)荧光定量反应液：0.2μmol/L正向引物、0.2μmol/L反向引物、0.2μmol/L荧光探针、5mmol/L Mgcl2、0.2mmol/L dNTP；其中，正向引物的序列为：5’-ATCAGCCAAATTTCCAAATGCTA-3’；反向引物的序列为：5’-CTATTCTCATGAATATGCCAAATGC-3’；荧光探针的序列为：5’-FAM-CTCCACATTGAAAGAAC-MGB-3’，荧光探针5’端标记的荧光报告基团是FAM，3’端标记的荧光淬灭基团是非荧光淬灭基团，连接MGB修饰基团；5)2×Buffer；6)无RNA酶的灭菌双蒸水；7)菜豆荚斑驳病毒的阳性对照样品。