一种土壤微生物基因组DNA提取方法

摘要

本发明涉及分子生物学技术领域，具体的说是一种土壤微生物基因组DNA提取方法。具体将土壤样品与石英沙相混合放入提取缓冲液中，而后将离心管置于核酸提取仪内振荡40－60秒，或在涡旋混合器上振荡10－20分钟；加将50－100μl溶菌酶，30－40℃温浴30－60分钟后，再加入75－125μl SDS混匀，再在50－60℃温浴30－60分钟，离心得上清液；经进一步分离纯化，即得土壤微生物基因组DNA。采用本发明方法提取的土壤基因组DNA纯度高，OD_260nm/OD_280nm值可达1.6以上，产量可达100ug/ml，全程用时约10小时；整个过程中不需用纯化试剂盒进一步纯化，可以直接应用于PCR扩增，以所得DNA为模板，可以顺利扩增出目的产物。

主权项

1.一种土壤微生物基因组DNA提取方法，其特征在于按如下步骤操作：1)初步裂解微生物细胞：取土壤样品与石英沙相混合放入含有850-1000μl提取缓冲液的离心管中，其中土样与石英沙重量比为1:0.5-2；而后将离心管置于核酸提取仪内振荡40-60秒，或在涡旋混合器上振荡10-20分钟；2)进一步裂解微生物细胞：将50-100μl浓度为100mg/ml的溶菌酶加入初步裂解液中混匀，在30-40℃温浴30-60分钟后，再加入75-125μl 20％(w/v)的SDS，混匀，再在60-70℃温浴30-60分钟，10000-12000转/分钟离心10-20分钟，收集上清；3)土壤微生物基因组DNA：将裂解后的缓冲液经分离纯化得粗提DNA溶液，而后将粗提液纯化，即得土壤微生物基因组DNA。