使用量子点改进聚合酶链式反应的方法

摘要

本发明公开了一种使用量子点改进聚合酶链式反应的方法，其步骤是：A.量子点的准备：量子点为水溶性；B.PCR体系的优化：将量子点加入PCR反应体系中进行PCR扩增；C.PCR产物的检测：对扩增后的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，与对照体系进行比较；D.量子点从反应体系中的分离并回收扩增得到的PCR产物：对反应结束体系进行离心，量子点被离心到底部，取上清得到所需PCR产物。本发明方法简便，操作方便，有效地提高了聚合酶链式反应的专一性和产率，消除了非特异性的扩增和假阳性扩增，增加了聚合酶链式反应的专一性，广泛应用于分子诊断、分子标记、法医鉴定、基因克隆等分子生物学的各个领域。

主权项

1.一种使用量子点改进聚合酶链式反应的方法，其步骤是：A、量子点的准备：量子点为水溶性，粒径大小为6-50nm，所述量子点为半导体纳米微颗粒；B、聚合酶链式反应体系的优化：将20-50nM的量子点加入PCR反应体系当中进行PCR扩增；设定如下：首先模板94℃变性4分钟；接着25-35个循环，每个循环包括：94℃变性30秒，25-65℃退火30秒到1分钟，72℃延伸30秒到15分钟，循环次数、退火温度25-65℃、退火时间30秒到1分钟、延伸时间30秒到15分钟，根据待扩增对象的长度和引物P1、P2、P3、P4不同；最后72℃延伸10分钟；C、PCR产物的检测：对扩增后的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，检查扩增条带，与对照体系进行比较；D、量子点从反应体系中分离并回收扩增得到的PCR产物：对反应结束体系进行离心，量子点被离心到底部，取上清得到所需PCR产物；所述的引物为P1：5’-GTGCGATCATACCAGCRYTAATGAACCGG-3’；所述的引物为P2：5’-GAGGTGCAACACGAGGACTTCCCAGGAGG-3’；所述的引物为P3：5’-GGCCTTCAGAGACGAGGTTG-3’：所述的引物为P4:5’-GCTGTGCATCAGGAATAATTTG-3’。