修复皮肤缺损的人工皮肤的制备方法

摘要

一种用于修复皮肤缺损的人工皮肤的制备方法，本发明是采用组织工程方法制备，包括培养液的配制、人工皮肤基质溶液的制备、人工皮肤的培养，能够将所缺失的真皮和表皮层同时修复；其人工皮肤包括表面的表皮细胞和其下的成纤维细胞；本发明制备的人工皮肤结构接近于天然皮肤，具有一定的弹性和韧性，可直接应用于炎症、溃疡、烧创伤、医源性等原因造成的皮肤缺损的修复。

主权项

1.一种用于修复皮肤缺损的人工皮肤的制备方法，包括人工皮肤培养液的配制、人工皮肤基质溶液的制备、人工皮肤培养的步骤，其特征在于，所述的人工皮肤培养是按以下方法操作：1)在人工皮肤基质溶液中按体积比加入10％的胎牛血清和10mg/ml的DMEM培养液，调节pH值至7.2-7.4，加入体外培养的人成纤维细胞悬液，使细胞终浓度为10⁴-10⁶个细胞/ml；再将其加至培养器皿中已固化的支撑膜上，在37℃、5％CO₂条件下固化30分钟；再将人工皮肤基础培养液加至其中；37℃、5％CO₂条件下培养2-4天，每天换液，形成人工皮肤的真皮部分；2)按10-100个/cm²的密度在制备的真皮表面扎孔；将体外培养的人表皮细胞，按10⁴～5×10⁵个细胞/cm²加至已制备的真皮表面，加入培养液A，37℃、5％CO₂条件下培养2～3天，每天换液；形成未成熟的人工皮肤；3)人工皮肤的成熟和角化：将人工皮肤培养支架另置于培养器皿中，把制备的未成熟的人工皮肤取出放在培养支架表面，加入培养液A淹没皮肤表面，培养1～2天后更换为培养液B，淹没皮肤表面，培养1～2天后更换为培养液C，液面与皮肤表面齐平，培养1～2天后更换为培养液D，液面与培养支架齐平培养4～6天，每天换液；培养条件均为37℃，5％CO₂环境，获得成熟人工皮肤；所述的人工皮肤培养液按体积百分比配制，分为基础培养液和培养液A、B、C、D，其中基础培养液的配制为：所述的培养液A：基础培养液+表皮生长因子1～100ng/ml                 +牛垂体提取物0.2％所述的培养液B：基础培养液+氯化钙0.1～1mM+L-抗坏血酸                 10～100mg/ml+表皮生长因子1～100ng/ml所述的培养液C：基础培养液+氯化钙0.2～2.0mM+L-抗坏血酸                 10～100mg/ml所述的培养液D：基础培养液+氯化钙0.3～3.0mM。