中药陆英颗粒有效成分及含量的测定方法

摘要

本发明属分析化学领域，具体涉及一种中药陆英颗粒有效成分鉴定及含量的测定方法。本方法以HPLC/MS法对中药陆英颗粒的有效成分多肽进行初步鉴定之后，再采用高效液相色谱法测定其有效成分多肽的含量。此方法能排除其他物质对有效成分多肽的干扰，采用通用型的液相色谱柱和紫外检测器即可对中药陆英颗粒的有效成分多肽进行高效液相色谱测定，多肽对照品缩宫素线性范围0.01～0.5mg/mL，最小检出量40ng。加样回收率97～102％，RSD小于2％。本发明可准确地用于中药陆英颗粒的有效成分多肽鉴定及含量测定。

主权项

1.中药陆英颗粒的有效成分的测定方法，其特征是包括下述步骤：(1)取待测样品，进行样品预处理：研细，精密称定，超声处理，放冷，稀释，离心，取上清液进样；(2)用HPLC/MS法对中药陆英颗粒的有效成分多肽进行鉴定：通过HPLC-MS检测得到物质组分的分子离子峰，推算所述物质的分子量，分子量大于200时，所出现的峰即为小分子多肽；其中：色谱条件：Agilent 1100型高效液相色谱/质谱仪，Agilent Zorbak，EclipseC18 150×2.1mm I.D.，5μm；流动相：A：0.1％三氟乙酸水，B：0.1％三氟乙酸乙腈，0到120分钟A∶B由95∶5变到70∶30；流速：0.5ml·min-1；检测波长：220nm；柱温：25℃；质谱条件：离子化方式：API-ES；碎裂电压：70ev；检测方式：正离子全扫描100到2000检测；干燥气流：液N2，流速10.0L/min，温度为350℃；雾化压力：50psig；毛细管电压：4000V；对照品溶液的制备：精密称取对照品缩宫素适量，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取中药陆英颗粒装量差异项下的内容物适量，研细，取2.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，加水适量，超声处理，功率250W，频率40kHz，30分钟，放冷，加水稀释至刻度，静置10分钟，取出1ml离心10分钟，每分钟转速4000转，取上清液，作为供试品溶液；测定法：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μ1进样，进行高效液相色谱-质谱分析；色谱峰的定位：在以上条件下，陆英颗粒中15个多肽类成分的保留时间分别为8.5min、12.1min、21.5min、22.6min、26.7min、40.7min、42.2min、46.0min、50.2min、56.1min、58.7min、61.6min、65.8min、69.9min、75.0min；相对保留时间，即相对于缩宫素75.7min的保留时间，为0.11、0.16、0.28、0.30、0.35、0.53、0.56、0.61、0.66、0.74、0.77、0.81、0.87、0.92、0.98；分子量分别为717.3、906.2、737.1、423.1、924.0、702.1、875.9、890.5、633.0、975.1、675.1、675.1、318.2、365.6、736.4；相对保留时间，即相对于最后一个多肽75.0min的保留时间，分别为0.11、0.16、0.29、0.30、0.36、0.53、0.56、0.61、0.67、0.75、0.78、0.82、0.88、0.93、1。