一种蝎毒提取物及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种从东亚钳蝎中提取的蝎毒提取物，其制备方法为：取蝎毒冻干粉溶解，离心，0.45μm及0.22μm的微孔滤膜过滤，冻干，葡聚糖凝胶，收集蝎毒III－IV蛋白峰，再进行阳离子交换层析，紫外分光光度仪检测，收集蛋白峰，即为本发明的蝎毒提取物。经试验证明，本发明的蝎毒提取物具有确切的抑制新生血管生成作用和抑制肝癌细胞再增值作用。本发明成功地从东亚钳蝎中提取出了其抑制血管生成和抑制肝癌细胞再增值的有效成分，为以后进一步的研究和应用提供了基础。

主权项

1.一种蝎毒提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用低温电脉冲刺激蝎口尾节得到液态粗毒，与双蒸水混匀，按体积比液态粗毒：双蒸水＝1：1.5～1：2，然后5000～6000转/分离心20～30分钟，低温真空冷冻干燥后得到蝎毒冻干粉；(2)将上述蝎毒冻干粉用水稀释为浓度1g/40ml、PH7.0～7.6的蝎毒液，然后5000～6000转/分离心20～30分钟，取上清液11000～13000转/分离心20～30分钟，取上清液；(3)将上述上清液分别用孔径0.45um及0.22um的微孔滤膜过滤一遍，收集滤液，放入冷冻槽冷冻12～36小时，温度—60～—89℃，再将冷冻槽放入冻干机真空干燥48～72h，收取冻干粉；(4)Sephadex G-50层析：层析柱用葡聚糖凝胶G—50填充，小牛血清50mg/20ml前导吸附；取经微孔滤膜过滤后的冻干粉洗脱，紫外分光光度仪检测，吸收波长280nm，收集蝎毒III—IV蛋白峰，操作温度为5℃；(5)阳离子交换树脂层析：层析柱用阳离子交换树脂填充，将经G-50收集的蝎毒III—IV上柱，流速0.5ml/分钟，梯度洗脱，紫外分光光度仪检测，吸收波长280nm，收集蛋白峰，操作温度为5℃；(6)将步骤(5)中得到的含有蝎毒多肽提取物的滤液置入冷冻槽冷冻24小时温度—70℃，再将冷冻槽放入冻干机真空干燥，收集冻干粉。