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1.一种雪莲愈伤组织诱导及组培苗快繁方法，其特征是，该方法包括以下步骤：(1).从野外直接采集野生的雪莲叶、根的新鲜外植体用于诱导愈伤；或在MS基本培养基上用雪莲种子萌发、培养无菌苗，然后以其叶、根或胚轴为外植体诱导愈伤；(2).分别以步骤(1)的雪莲苗的叶、根或胚轴为外植体，无菌外植体分别直接接入MS添加N6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、2，4-二氯苯氧乙酸和蔗糖的培养基中，其中MS培养基中的N6-苄基腺嘌呤浓度为0.01～3.0毫克每升，萘乙酸的浓度为0.01～5.0毫克每升，2，4-二氯苯氧乙酸的浓度为0～2.5毫克每升，蔗糖的浓度为5～80克每升，培养基的pH值5.7～6.0，加入培养基量的1～9克每升琼脂，在温度115～125℃下灭菌，冷却培养基，在温度15～35摄氏度，光照1000～5000勒克司下培养，诱导出雪莲苗的叶、根或胚轴外植体的愈伤组织；(3).采用固体培养、悬浮培养或生物反应器大规模培养扩繁步骤(2)雪莲苗的叶、根或胚轴外植体的愈伤组织的胚性愈伤或体胚，将扩繁后的胚性愈伤或体胚接入MS添加N6-苄基腺嘌呤、萘乙酸和1-苯基-3-(1，2，3-噻二唑-5-基)脲的培养基上，其中，MS培养基中N6-苄基腺嘌呤的浓度为0.01～2.5毫克每升，萘乙酸的浓度为0.05～2.0毫克每升，1-苯基-3-(1，2，3-噻二唑-5-基)脲的浓度为0～5毫克每升；在温度为15～35摄氏度，光照1000～5000勒克司下培养，萌发出芽或植株；将萌发出的丛生芽大于1厘米小于3厘米的单芽切出，在MS添加N6-苄基腺嘌呤、萘乙酸和1-苯基-3-(1，2，3-噻二唑-5-基)脲的培养基中进行扩繁，其中MS培养基中N6-苄基腺嘌呤的浓度为0.01～2.5毫克每升，萘乙酸的浓度为0.01～5.0毫克每升，1-苯基-3-(1，2，3-噻二唑-5-基)脲的浓度为0～5毫克每升，待单芽生长到≥4厘米时转入生根培养基中生根；或将萌发出≥4厘米的单芽转入生根培养基中生根；或将萌发的植株转入MS基本培养基上生长；(4)将步骤(3)的单芽转入生根培养基中生根，是采用容器内无菌生根或者开放式生根；在容器内生根时，将单芽转入MS添加吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸和活性炭培养基的培养器中，其中，MS培养基中吲哚乙酸的浓度为0.01～2.0毫克每升，吲哚丁酸的浓度为0.01～2.0毫克每升，萘乙酸的浓度为0.01～2.0毫克每升，活性炭的质量浓度为0～2.0％；或者将单芽转入装有灭菌后的蛭石的开放式容器中，所述的蛭石用1/2浓度的MS添加有浓度为0.01～2.0毫克每升的吲哚乙酸，浓度为0.01～2.0毫克每升的吲哚丁酸，浓度为0.01～2.0毫克每升的萘乙酸的培养液浸透，在温度为15～35摄氏度，光照1000～5000勒克司下培养；(5).将步骤(4)容器内生根的雪莲组培苗或容器外生根的雪莲组培苗，或步骤(3)中转入MS基本培养基生长的植株；转入到壤土+蛭石中进行炼苗，其中，壤土与蛭石的体积比是10:1～1:10。 |
