主权项 |
1 一种酪氨酸酶模拟酶的制备方法,该方法是:A)将环糊精按质量比1∶15~25加入干吡啶中溶解,然后按环糊精与邻-碘酰基苯甲酸的摩尔比为1∶0.2~0.4逐滴加入间苯二磺酰氯;在25℃下反应1小时,停止反应,在低于25℃条件下减压蒸除吡啶,浅褐色残余物在液氮保护下在低于25℃下真空干燥,得到的粗产物按质量比1∶8~15溶于40%质量百分比浓度的乙醇水溶液中,滤去不溶物后按质量比1∶8~15逐滴加到83%质量百分比浓度的乙腈水溶液中,抽滤,除去白色沉淀,在30℃下减压蒸除溶剂,残留物溶于适量20%质量百分比浓度的乙醇水溶液中,搅拌1小时,在30℃下蒸除溶剂,在20~30℃下真空干燥即得到6位双取代环糊精磺酸酯;B)将6位双取代环糊精磺酸酯按质量比为1∶30~50加入到N,N-二甲基甲酰胺中,搅拌溶解;然后按6位双取代环糊精磺酸酯与碘化钠的质量比为1∶1~1.5加入碘化钠,在60~90℃下搅拌反应2~45h,在40℃下减压蒸干N,N-二甲基甲酰胺;在产物中加入丙酮,搅拌、过滤,收集滤饼再加入丙酮,重复三次,除去未反应的碘化钠;将所得固体溶于水中,加入丙酮得到沉淀,在40~45℃下真空干燥即得到双碘代环糊精;C)将双碘代环糊精按质量比为1∶10~15加入到N,N-二甲基甲酰胺中,搅拌溶解;然后按双碘代环糊精与组氨酸的质量比为1∶0.8~1.5加入组氨酸,在80℃下反应24小时;将反应得到的悬浊液抽滤,收集滤液,在40℃下减压蒸馏去除溶剂,所得黄色蜡状物用丙酮洗至丙酮变无色;所得固体溶于水中并重新用丙酮沉淀,收集沉淀物、干燥后即得到环糊精双组氨酸衍生物;D)将环糊精双组氨酸衍生物按质量比为1:500~2000投入PH值为7~9的磷酸盐缓冲液中,待完全溶解后,按环糊精双组氨酸衍生物与硫酸铜的摩尔比为1∶1~5加入硫酸铜,过滤,除去不溶物,加入适量丙酮,静置,析出晶体,用丙酮洗涤,在20~40℃下干燥,得到酪氨酸酶模拟酶。2 根据权利要求1所述的酪氨酸酶模拟酶的制备方法,其特征在于所述的环糊精为β-环糊精。 |