基于金纳米探针和核酸酶无标记比色测定金属铅离子的方法

摘要

本发明涉及基于金纳米探针和核酸酶无标记比色测定金属铅离子的方法。17E型核酸酶与其底物杂交形成双链结构。若待测样品中含铅离子时，则铅离子能够极大地提高17E型核酸酶催化切断底物的速度，底物被切断后，双链结构解离产生游离的单链DNA可吸附在金纳米探针表面，保护其不被盐诱导聚集，故金纳米探针溶液呈酒红色；若待测样品中不含铅离子时，则17E型核酸酶与其底物的双链结构不会被破坏，此双链结构不与金纳米探针作用，故金纳米探针会被盐诱导聚集而呈蓝紫色。通过金纳米颜色的变化，能够实现铅离子的检测。对于铅离子的检出限为500纳摩尔每升。此种比色方法检测铅离子，选择性高、灵敏度高、操作简单、无需复杂仪器。

主权项

1、基于金纳米探针和核酸酶无标记比色测定铅离子的方法，其特征在于，步骤和条件如下：(1)用参考文献方法合成13nm的金纳米探针(参考文献；Grabar，K.C.；Freeman，R.G.；Hommer，M.B.；Natan，M.J.，Preparation andCharacterization of Au Colloid Monolayers.Anal.Chem.1995，67，(4)，735-743)；(2)在含有140mM的NaCl，5mM KCl和20mM pH＝7.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中，配制17E型核酸酶与其底物的溶液；17E型核酸酶的序列为5’CAT CTC TTC TCC GAG CCG GTCGAA ATA GTG AGT3’；17E型核酸酶底物的序列为5’ACT CACTAT rA GGA AGA GAT G3’；(3)将1μM的17E型核酸酶及1μM的17E型核酸酶底物混合均匀，在90℃水浴反应5分钟，降至室温，得到1μM双链产物；在4℃存放备用；所述的1μM的17E型核酸酶：1μM17E型核酸酶底物的体积比为1：1；(4)取1μM(3)中双链产物，加入铅离子溶液，4℃反应10分钟；所述的1μM双链产物：铅离子溶液的体积比为2：1；待测铅离子的浓度范围可从500纳摩尔每升到1000微摩尔每升；(5)将(4)中的反应液与13nm金纳米探针溶液混合，室温反应5分钟；所述的(4)中反应液：13nm金纳米探针溶液的体积比为1：5；(6)接着向(5)中的反应液中，加入0.5M的氯化钠溶液；加入氯化钠后，马上测定反应溶液的吸收光谱，或者直接用肉眼观察溶液的颜色变化，完成基于金纳米探针和核酸酶无标记比色测定金属铅离子的方法；所述的0.5M氯化钠溶液：13nm的金纳米探针溶液体积比为1：10。