辅酶Ⅰ及其衍生物含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种辅酶I及其衍生物含量的测定方法。配置pH8.0-11.0焦磷酸钠缓冲液，其中含有体积百分比为0.01％-0.3％水合肼。在上述缓冲液中加入底物溶液和待测定的辅酶I及其衍生物测定液，在分光光度计上，于还原型辅酶I及其衍生物的最大吸收峰处调零后，加入3α-类固醇脱氢酶，反应至吸光值不再增加为止，根据吸光值变化计算辅酶I的含量。本发明的3α-类固醇脱氢酶是诊断试剂的常用原料，来源广泛。反应缓冲液中加入肼使反应向正方向进行，辅酶I及衍生物将全部转化为还原型辅酶I及衍生物，根据还原型辅酶I及衍生物在特定波长的摩尔吸光值，可以定量的计算出辅酶I及衍生物的含量。

主权项

1.一种辅酶I及其衍生物含量的测定方法，其特征在于：配置0.03-0.2mol/L、pH8.0-11.0焦磷酸钠缓冲液，其中含有体积百分比为0.01％-0.3％水合肼，加入底物和辅酶I及其衍生物待测定液，底物浓度为0.005-0.08mg/ml，辅酶I及其衍生物待测定液的浓度为0.01-0.3mg/ml；在分光光度计上，于还原型辅酶I及其衍生物的最大吸收峰处调零后，按反应体积加入0.05-1U/ml的3α-类固醇脱氢酶，反应至吸光值不再增加为止，根据吸光值变化计算辅酶I的含量，依如下计算公式计算辅酶I及其衍生物含量，计算公式为：辅酶I及其衍生物待测定液样品含量(w/v)＝(A-A0)×V1×Mw/(ε×V2)×100％，其中A为加3α-类固醇脱氢酶反应最终吸光值，A0为不加3α-类固醇脱氢酶的最终吸光值，V1为反应体积，V2为辅酶I及其衍生物待测定液体积，Mw为辅酶I或其衍生物分子量，ε为还原型辅酶I或其衍生物的摩尔吸光值，所述的底物为雄酮、胆酸钠或脱氧胆酸钠。