一种从脐带血中分离多能成体祖细胞的方法

摘要

本发明公开了一种从脐带血中分离多能成体祖细胞的方法，包括利用淋巴细胞分离液分离脐带血单个核细胞，在含有8～15％胎牛血清的培养基中培养3天，弃去未贴壁的细胞，继而更换为含2～5％胎牛血清、人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人表皮生长因子(EGF)、人血小板衍生的生长因子(PDGF-BB)、MCDB-201、抗坏血酸、地塞米松和ITS添加剂的培养基中继续贴壁培养，传代纯化分离。采用本发明的方法从脐带血中分离多能成体祖细胞，与其它方法相比，分离成功率高，所获细胞表型、细胞周期和诱导分化能力相同。因此，用此方法分离脐带血多能成体祖细胞可显著提高效率。

主权项

1、一种从脐带血中分离多能成体祖细胞的方法，依次包括以下步骤：第一步：将体外脐带血用磷酸盐缓冲液等倍稀释，利用淋巴细胞分离液分离单个核细胞；第二步：将分离的脐带血单个核细胞在含有8～15％胎牛血清的培养基中培养48-72小时，弃去未贴壁的细胞；第三步：更换为含2～5％胎牛血清、人碱性成纤维细胞生长因子bFGF、人表皮生长因子EGF、人血小板衍生的生长因子PDGF-BB、MCDB-201、抗坏血酸、地塞米松和1×胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠ITS添加剂的培养基中继续贴壁培养；第四步：传代纯化分离脐带血多能成体祖细胞。