灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法，技术特征是分二步进行发酵转化，第一步是好氧菌发酵阶段，第二步是厌氧菌发酵阶段，组分一用于好氧菌发酵阶段，组分二用于厌氧菌发酵阶段。将组分1、组分2、聚木糖和无水氯化钙按比例混合即制成多种有益微生物复合而成的菌剂。本制备方法工艺简单、好操作，它制备的菌剂，通过微生物繁殖、代谢过程中所产生的多种生物酶及代谢产物，把不能用于饲喂反刍家畜的柠条等灌木转化成为绿色优质粗饲料，为奶牛、肉牛、羊及各种反刍动物开辟了新的粗饲料资源。

主权项

1、灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法，其特征是：本制备方法分二步进行发酵转化，第一步是好氧菌发酵阶段，组分一用于好氧菌发酵阶段，第二步是厌氧菌发酵阶段，组分二用于厌氧菌发酵阶段，组分一制作方法：1、木霉孢子型培养干燥物的制作方法：一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、二级菌种的制作方法按常规法制作，曲盘培养基制作方法是将小麦麸粉50％、玉米芯粉49.6％先混合均匀，用0.4％无水氯化钙加水的溶液均匀喷洒，再用pH4.5的硫酸水溶液拌湿，使含水量达到55％～60％，搅拌均匀后后装入曲盘灭菌，待温度降到35℃时，将三角瓶中的菌种装入灭菌曲盘，在无菌条件下35℃培养，培养过程中观察孢子数量，当孢子数量达到5亿个/克以上时，用低温干燥至水分小于10％后贮存备用；2、枯草芽孢杆菌培养干燥物的制作方法：一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、二级菌种的制作方法按常规法制作，三级菌种的制备方法是将玉米粉3％、豆粕粉3％、庶糖2％、氯化钠0.5％、硫酸锰0.1％加水至100％装入发酵罐内灭菌成培养基，待温度降到37℃时，接入二级枯草芽孢杆菌菌种，并在通气和搅拌的条件下培养至活菌数达到10亿个/ml以上停止培养，枯草芽孢杆菌培养干燥物的制作方法是将玉米粉3％、豆粕粉3％、庶糖2％、氯化钠0.5％、硫酸锰0.1％加水至100％，装入容积为三级种子罐10倍量大的发酵罐内灭菌，待温度降到36～38℃时，按10％的比例接入枯草芽孢杆菌三级菌种，并在通气和搅拌的条件下培养至活菌数达到10亿个/ml以上并有70％以上的活菌形成芽孢时停止培养，然后将培养液与灭菌玉米芯按1∶1的比例混合均匀，低温干燥至水分小于10％后贮存备用；将培养液与灭菌玉米芯按1∶1的比例混合均匀，低温干燥至水分小于10％后备用；枯草芽孢杆菌培养干燥物的制作方法是将玉米粉3％，豆粕粉3％，庶糖2％，氯化钠0.5％，硫酸锰0.1％，加水至100％，装入容积为三级种子罐10倍量大的发酵罐内灭菌，待温度降到36～38℃时，按10％的比例接入枯草芽孢杆菌三级菌种，并在通气和搅拌的条件下培养至活菌数达到10亿个/ml以上并有70％以上的活菌形成芽孢时停止培养。然后将培养液与灭菌玉米芯按1∶1的比例混合均匀，低温干燥至水分小于10％后贮存备用；3、酿酒酵母培养干燥物的制作方法：一级菌种的扩培为普通试管培养基培养，二级种子的扩培为转瓶液体培养法，培养基成分控制在还原糖浓度为45％±10％，含0.2～0.45％硫酸铵和0.1％磷酸，pH为5.0～7.0，培养方法按常规法进行，酿酒酵母细胞培养干燥物的制备方法是将庶糖3％、玉米粉1％、尿素0.3％混合后加水至100％成培养基装入培养罐中灭菌，待温度降至27～29℃时，取二级种子培养液0.2％接种于本培养液中，在搅拌条件下培养14～15小时，加入尿素0.2％，培养19～20小时，再加入尿素0.2％，到24小时检查活细胞总量，待活细胞总量大于5亿个/ml时停止培养，用沉降式高速离心机离心后，取沉淀物低温通风干燥至水分小于10％后贮存备用；将以上各菌培养干燥物按木霉孢子型培养干燥物48～52％、枯草芽孢杆菌培养干燥物24～26％、酿酒酵母细胞培养干燥物24～26％的比例混合，制成组分一；组分二制作方法：1、粪肠球菌的制备方法：粪肠球菌原种为中科院微生物研究所提供的1.3.1号菌种，一、二级菌种的扩培为试管培养及三角瓶培养，一、二级菌种的制作方法按常规法制作，粪肠球菌培养干燥物制备方法是将脱脂牛奶2％、葡萄糖1.1％、蛋白胨0.3％、吐温-80 0.05％、磷酸氢二钾0.2％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.005％、碳酸钙2％加水至总量100％成培养基，调节pH值到6.8，在发酵罐中灭菌，在搅拌条件下将温度降至29～31℃，接入二级菌种，培养18～20小时，当培养液中的活菌数达到10亿个/ml以上时，再加入1％灭菌脱脂牛奶和0.005％的Vc，待充分搅拌均匀后，按1∶1的比例与经过灭菌消毒的玉米芯粉混合均匀，然后干燥至水分小于10％后贮存备用；2、植物乳杆菌的制备方法：菌种由轻工业部食品发酵研究院提供，菌号：6026，生产培养基配方及培养方法与粪肠球菌相同，载体及干燥方法与粪肠球菌相同；3、戊糖片球菌的制备方法，菌种由轻工业部食品发酵研究院提供，菌号：10196，生产培养基配方及培养方法与粪肠球菌相同，培养温度为26℃，载体及干燥方法与粪肠球菌相同；将以上各菌培养干燥物按粪肠球菌培养干燥物19～21％、植物乳杆菌培养干燥物38～42％、戊糖片球菌培养干燥物38～42％的比例混合，制成组分二；最后，将组分一、组分二再加栽体低聚木糖、无水氯化钙混合制成菌体混合物，经检验、包装即为灌木生物饲料专用复合菌剂成品。成品中组分一、组分二、低聚木糖、无水氯化钙各占百分比为26～28％、38～42％、28～32％、3％。