柞蚕溶菌酶的基因序列及其表达产物的制备方法

摘要

柞蚕溶菌酶基因是用大肠杆菌诱导柞蚕蛹，取柞蚕蛹脂肪体，提取总RNA，反转录成cDNA。根据已知溶菌酶基因的序列，设计简并引物，用RLM-RACE方法分别获得柞蚕溶菌酶基因5’端和3’端非编码区基因片段，并进行序列分析。根据测序结果，设计引物，通过PCR扩增得柞蚕溶菌酶基因编码区片段，并推测出编码的氨基酸序列。柞蚕溶菌酶基因编码区核酸序列为420bp，编码140个氨基酸，其中前20个氨基酸为信号肽序列，成熟肽部分为120个氨基酸；预测分子量为13,986，等电点为pI 8.46。120个氨基酸的基因片断经克隆、转化、筛选、培养、分离和层析纯化得到其表达产物。

主权项

1.一种柞蚕溶菌酶基因，其完整的cDNA序列为：aaaatacgtctaacgacatcgacgcaggtgacacgcgtttaaaaATGTTCAAGTATATTGTTTTGTTTGCCGTTTTGGCTCTGTCTTTGCATAATTGCGAGGGGgaaaacgcttgtggaagcaaactaagtaaatctcgttatttcatctctgaaaataaaagaagtaatattacaaaagaatgctctcgaaaaacaaaatttaactattatttcgtgtttacattgtgatagatattgttattatttaaacacaaagccttttctacttttttacatatgagaaataaagacttcataacaaaaaa其中：大写字母表示柞蚕溶菌酶基因编码区的碱基序列：有下划线的部分为柞蚕溶菌酶信号肽碱基序列，黑体大写字母部分为柞蚕溶菌酶成熟肽碱基序列；其余小写字母部分分别为柞蚕溶菌酶基因的5’端和3’端非编码区碱基序列。