一种提高大豆抗虫性的转基因方法

摘要

本发明为一种提高大豆抗虫性的转基因方法，属于大豆转基因育种方法，是将吡喃酮合酶基因g2ps1利用花粉管通道法转入大豆，对转基因植株苗期进行卡那霉素鉴定，筛选出抗卡那植株，进一步进行PCR鉴定及RT-PCR鉴定，并结合室内喂养斜纹夜蛾的抗虫性鉴定，选育出转基因抗虫大豆材料，养虫结果表明两个转基因材料喂养的幼虫重及蛹重与对照喂养的之间都存在显著差异(显著水平P＞P0.05)，说明与对照相比，转基因材料能明显抑制斜纹夜蛾的生长发育。

主权项

1、一种提高大豆抗虫性的转基因方法，包括：1)应用包含有吡喃酮合酶基因g2ps1的农杆菌phtt376，利用花粉管通道法转化大豆波高和南农73-935；2)从T1代开始，对转基因植株苗期进行卡那霉素抗性鉴定，将抗性植株进一步做PCR鉴定，PCR扩增体系含0.25mM dNTP，MgCl2，1UTaq酶，0.5μM引物，100-200ngDNA，总体积25μl，PCR扩增反应条件：预变性95℃5min，后经95℃15s，52℃59s，72℃2min，30个循环，72℃延伸10min，选择PCR鉴定结果为阳性的材料；3)T2代仍然对转基因植株苗期进行卡那霉素抗性鉴定，将卡那抗性植株做PCR鉴定，PCR扩增体系同上，选择PCR鉴定结果为阳性的材料；再以此材料进一步做RT-PCR鉴定，大豆总RNA采用‘天为时代公司植物总RNA提取试剂盒’提取，PCR扩增体系同上，选择RT-PCR鉴定结果为阳性的材料；4)对T2代转基因材料进行室内喂养斜纹夜蛾的抗性虫鉴定：于大豆开花期，采摘植株上完全展开叶，养虫容器为大号一次性有盖塑料杯，每杯接种1日龄斜纹夜蛾幼虫6头，重复三次，采集转基因植株和对照植株各材料的叶片喂养，28℃，光照14h/d，每天更换新鲜叶片两次；喂养至第十天时称每杯幼虫重；同时观察斜纹夜蛾生长状况，第十天时对照植株喂养的斜纹夜蛾长至5龄，而转基因植株喂养的斜纹夜蛾长至4龄，称重后每天记录幼虫化蛹情况，待每杯幼虫完全化蛹后第四天称蛹重；将幼虫重及蛹重两组数据进行方差分析，两个转基因材料波高、南农73-935喂养的幼虫重及蛹重与对照喂养的之间都存在显著差异，显著水平P＞0.05，该材料即为获得的通过抗性鉴定的转基因材料。