利用分枝杆菌深度脱除化石燃料中有机硫的方法

摘要

本发明公开了一种利用分枝杆菌深度脱除化石燃料中有机硫的方法，该方法包括(1)菌种选择，(2)斜面培养，(3)一级种子培养，(4)扩大培养，(5)发酵罐培养，(6)收集菌体，(7)处理样品，(8)分离样品，(9)样品检测等步骤；具有方法简便，温度要求宽泛(25-50℃)，耗能低，脱硫率高等特点，在大气污染治理方面具有很大的应用前景。

主权项

1.一种利用分枝杆菌深度脱除化石燃料中有机硫的方法，其步骤顺序如下：(1)菌种选择：选用分枝杆菌中古的分枝杆菌(Mycobacterium goodii)DSM 44492；(2)斜面培养：将上述菌株接种于含有1.5～2.0％的琼脂糖并加有0.1～2.0mmol/LDBT的MAM，固体斜面培养基上，25～50℃培养菌体20～30小时；(3)一级种子培养：将步骤(2)培养的菌株，无菌条件下用接种环接1～4环于20～100mL含有0.1～2.0mmol/L DBT的MAM液体培养基中，25～50℃条件下，在摇床上振荡培养20～30小时，制得一级种子；(4)扩大培养：以体积比5％接种量，接一级种子于300～1000mL含有0.1～2.0mmol/L DBT的MAM液体培养基中，25～50℃条件下，在摇床上振荡培养20～30小时，制得二级种子；(5)发酵罐培养：以体积比5％接种量，接二级种子于1.8～8L含有0.1～2.0mmol/L DBT的MAM液体培养基中，25～50℃条件下，培养20～30小时；在上述分枝杆菌深度脱除化石燃料中硫的方法中，使用的MAM培养基为改良的A培养基，配方如下：10克葡萄糖，0.5克KH2PO4，4克K2HPO4，1克NH4Cl，2mL质量百分比为1％的CaCl2，2mL质量百分比为10％的MgCl2·6H2O，200μL质量百分比为1％的FeCl3，200μL质量百分比为5％的NaCl，5mL质量百分比为1％的 酵母膏，200μL的维生素混合液，5mL的金属离子混合液，加蒸馏水到1升；115℃条件下灭菌20分钟；金属离子混合液的配方为，每升蒸馏水含有：ZnCl2 0.5g；FeCl2 0.5g；MnCl2·4H2O 0.5g；Na2MoO4·2H2O 0.1g；CuCl2·2H2O 0.05g；Na2WO4·2H2O 0.05g；HCl120mmol/L；维生素混合物的配方为，每升蒸馏水含有：400mg泛酸钙；200mg肌醇；400mg尼克酸；400mg VB6；200mg对氨基苯甲酸；0.5mg VB12；(6)收集菌体：在5000转/分条件下离心5～8分钟，收集步骤(5)制得的菌体，并用生理盐水洗涤2～3次；再将菌体溶于120mL的20～100mmol/L的磷酸钾缓冲液中，调节pH至7.5，使菌体的浓度达到10～30克干细胞/升，即制得生物催化剂，在-20℃储存，备用；(7)处理样品：加入12～40mL含硫化石燃料样品或10～30克固体含硫化石燃料样品，以3～10∶1的比例，将步骤(6)中的生物催化剂与化石燃料混合，在25～50℃条件下，180转/分钟振荡24～30小时；(8)分离样品：以10,000转/分离心5～10分钟，分离步骤(7)中处理的样品，得到油相；(9)样品检测：待步骤(8)中的样品分离完之后，取1～5μL样品进样，测定化石燃料中残留的硫含量，得出脱除率。