沙门氏菌原位荧光环介导快速检测试剂盒及其使用方法

摘要

本发明公开了一种沙门氏菌原位荧光介导快速检测试剂盒及其使用方法，该试剂盒包括引物混合液，其序列为外引物1：GTTCAACAGCTGCGTCATGA；外引物2：CGCTATTGCCGGCATCATTA；内引物1：CCCAGATCCCCGCATTGTTGATTTTTCCGCCCCATATTATCGCTAT；内引物2：Cy3－GACCATCACCAATGGTCAGCATTTTATTGGCGGTATTTCGGTGGG；Bst DNA聚合酶、蛋白酶K、RNA酶、溶菌酶溶液、LAMP反应缓冲液、磷酸缓冲液、通透性处理试剂、系列浓度乙醇溶液、复染剂、阳性对照。利用该试剂盒通过沙门氏菌菌体固定处理、细胞通透性处理、恒温基因扩增反应、判断反应产物结果实现对沙门氏菌高特异性、快速、高效、高灵敏度、简便的原位检测。

主权项

1、一种沙门氏菌原位荧光环介导快速检测试剂盒，其特征在于，试剂包括：①引物混合液：混合液中四条引物浓度均为10pmol/μl，引物序列如下：外引物1：GTTCAACAGCTGCGTCATGA；外引物2：CGCTATTGCCGGCATCATTA；内引物1：CCCAGATCCCCGCATTGTTGATTTTTCCGCCCCATATTATCGCTAT；内引物2：Cy3-GACCATCACCAATGGTCAGCATTTTATTGGCGGTATTTCGGTGGG；②Bst DNA聚合酶：浓度为8U/μl；③蛋白酶K：浓度为0.1-0.2μg/ml；④RNA酶：浓度为0.4-0.6mg/ml；⑤溶菌酶溶液：0.5mg/ml溶菌酶，pH 8.0-9.0、100mMTris-HCl，50mM EDTA；⑥LAMP反应缓冲液：10mM dNTP∶10×ThermoPol反应缓冲液∶150mM MgSO₄∶5mMBetina＝8∶5∶2∶10体积；⑦磷酸缓冲液；⑧通透性处理试剂1：为3-5％质量的多聚甲醛；⑨通透性处理试剂2：为0.02-0.04％质量的多聚赖氨酸；⑩系列浓度乙醇溶液：为30-60％体积乙醇、60-90％体积乙醇、90-100％体积乙醇；复染剂：荧光染料1-2mg/ml DAPI；阳性对照为猪霍乱沙门氏菌基因组DNA。