| 主权项 |
1﹒于样品中扩大及侦测标的核酸序列的方法 ,包括: (a)用寡核菩酸引子与各种标的及其互补 股分别杂交,其中之一共轭至反应性配 对一成员且另一个别共轭或可与可侦测 的部份反应; (b)自每个引子合成互补于核酸股的伸展 产物,各个引子的伸展产物可形成模板 ,一旦伸展产物与其互补物分离则可自 另一引子合成伸展产物, (c)自模板上分出引子伸展产物,其上其 被合成可生成单股分子; (d)用(a)步骤的引子处理由(c)步骤生 成的单股分子,其条件系可合成引子伸 展产物,其中利用(c)步骤中生成的每 个单股为模板以形成双股产物; (e)将(c)步骤的该双股产物捕获在固相 上,其上并已有至少一反应性配对中一 成员,如此该双股产物可利用该反应性 配对而链结于固相上;且 (f)侦测结交至该固相上之可侦测部份。 2﹒根据申请专利范围第1项之方法,其中 (a)步骤的另一引子是直接地共轭至可侦 测部份。 3.根据申请专利范围第1项之方法,其中 (a)步骤的另一引子是共轭至第二反应性 配对的第一成员,该第二反应性配对的第 二成员系共轭至可侦测的部份,且其中在 (f)步骤前此方法进一步包括用该第二反 应性配对之第二成员处理该双股产物。 4﹒根据申请专利范围第3项之方法,其中该 反应性配对系选自下列基团:抗体及抗原 、生物素及抗生物素、酵素及酵素受体, 碳水化合物及外源凝集素、生物素及抗一 生物素、及成对的互补DNA股。 5﹒于样品中进一步扩大及侦测经扩大且双股 的标的核酸序列之方法,包括: (a)将成对的第二寡核菩酸引子与互补的 经扩大标的股杂交,该第二引子的每个 均已链结至不同反应性配对之第一成员 上; (b)自每个第二引子合成互补于标的核酸 股之伸展产物,各个引子的伸展产物可 形成模板,一旦伸展产物与其互补物分 离则可自另一引子合成伸展产物; (c)自模板上分出引子伸展产物,在其上 可合成单股分子; (d)用(a)步骤的引子处理由(c)步骤生 成的单股分子,其条件系可合成引子伸 展产物,其中利用(c)步骤中生成的每 个单股为模板以形成双股产物; (e)将(c)步骤的该双股产物捕获在固相 上,其上并已有该反应性配对之一的第 二成员,如此该双股产物可利用该反应 性配对而链结于固相上;且 (f)在(e)步骤前、中或后,用该反应性 配对另一个可侦测之第二成员处理(c) 步骤的双股产物,该第二成员系可与该 双股产物上的另一第一反应而与之链结 ;且 (g)侦测和该固相结交之可侦测的第二成 员,以显示是否存在有标的股之经扩大 产物。 6﹒根据申请专利范围第5项之方法,其中该 第一次扩大作用系利用成对的第一寡核菩 酸引子以PCR来进行。 7﹒根据申请专利范围第1或5项之方法,其 中(c)及(d)步骤至少重覆一次。 8﹒于样品中扩大及侦测标的寡核菩酸序列的 方法中,其中针对每一标的序列应用两个 第一引子,其中之一与标的序列杂交且另 一个则与其互补物杂交,而形成互补于标 的及其互补物之第一伸展产物,第一伸展 产物形成模板而自第一引子合成进一步的 第一伸展产物,此改进方法包括: 在第一引子与标的序列反应中或后, 用至少一个额外的第二引子处理第一伸展 产物,其可与至少一个第一伸展产物在第 一引子末端3′位置处杂交而形成第二伸 展产物,该第二引子已与第一反应性配对 中一成员链结;且 侦测是否有第二伸展产物被形成。 9﹒根据申请专利范围第8项之方法,其中该 第一伸展产物用至少两个第二引子处理, 一个第二引子与第一反应性配对的一成员 链结,且第二个第二引子与第二反应性配 对之一成员链结。 10﹒根据申请专利范围第9项之方法,其中 该第一及第二反应性配对中至少一个是可 与可侦测部份反应的,且该第二伸展产物 藉着该可侦测部份与反应性配对之反应而 侦测,并侦测该可侦测部份。 11﹒根据申请专利范围第9项之方法,其中 该第二引子中至少一个与特异的结合性配 对中一成员链结,且该第二伸展产物之侦 测系将第二产物与已链结有该特异结合配 对中另一成员之固相分离,并侦测是否有 第二伸展产物被捕获在该固相上。 12﹒根据申请专利范围第8项之方法,其中 该第一引子中至少有一个链结有第二反应 性配对之一成员。 13﹒根据申请专利范围第3.9或12项之方 法,其中共轭至反应性配对第一成员的二 个引子均共轭至可与普通第二成员反应之 成员上。 14﹒于样品中扩大及侦测标的寡核芋酸序列 的方法中,其中针对每一标的序列应用至 少两个引子,其中之一与标的序列杂交且 另一个则与其互补物杂交,而形成互补于 标的及其互补物之伸展产物,伸展产物形 成模板而自引子可合成进一步的伸展产物 ,此改进方法包括:将该引子至少一个链 结至反应性配对之第一成员,用固 相自 该样品中分出伸展产物且固相上已联结有 该反应性配对中之第二成员,并侦测另一 个引子。 15﹒根据申请专利范围第14项之方法,进一 步包括将一个可侦测之标记物提供给另一 副子并与直接链结,由是该伸展产物与固 相之分离可藉标记物侦测之。 16﹒根据申请专利范围第14项之方法,其中 反应性配对选自下列基团包括:抗体与抗 原、生物素与抗生物素、碳水化合物与外 源凝集素,及酵素与酵素受体。 17﹒用以扩大及侦测标的核酸序列之操作组 ,包括: 至少二个引子,一个引子与该标的序 列互补,且另一引子与互补于标的序列互 补,其中引子伸展产物可自该引子处被合 成,如此每一伸展产物形成模板而自引子 合成进一步的伸展产物,且其中该引子中 至少有一个与反应性配对成员相链结; DNA聚合丑;及 固相,其上已链结有反应性配对中一 成员,且其可与该引子上之反应性配对成 员结合。 18﹒根据申请专利范围第17项之操作组,其 中另一副子与第二反应性配对中之第一成 员相链结。 19﹒根据申请专利范围第18项之操作组,进 一步包括一个共轭物,其含有链结至该第 二反应性配对之第二成员的可侦测部份。 20﹒根据申请专利范围第17项之操作组,其 中另一引子系与可侦测之标记物相链结。图示简 单说明: 图1图示本发明的第一个具体实例, 其中应用二个引子,每一个链结至反应性 配对之一成员; 图2为本发明之第二具体实例,其中 使用二对引子,一对〝隐匿〞在另一对间 ,每一隐匿封在其上链结有反应性配对; 图3为本发明的第三具体实例,其中 使用三个引子其中一个引隐匿在另二个之 间; 图4为本发明之第四个具体贯例,其 中使用二对〝隐匿〞的引子,其中一对链 结有一反应性配对中之一成员,另一配对 也有第二个反应性配对中一成员链结于其 上; 图5为本发明的第五个具体实例,其 中使用二个引子,一个链结有反应性配对 中之一成员,另一个则链结有可侦测部份 ; 图6是非仪器判读分析结果之照片, 在上左方之探针既不含生物素也不含萤光 ,上右方只含生物素,左下方只含萤光, 而下右方含有生物素及萤光;及 图7是免疫层析分析的照片,其中在 O长条上的探针不含生物素也不含萤光, F条片只含萤光,B条片只含生物素,及 FB条片含有生物素及萤光。 |
