发明名称 一种生产嵌合DNA序列包含cDNA的方法,cDNA其系为编码一个可导引植物发病病因相关蛋白质,及一种
摘要 本发明系有关实质纯cDNA编码一个可导引植物发病病因之相关蛋白质,其系选自PR-P,PR-Q ,PR-O',SAR8.2a, SAR8.2b,PR.2,胡瓜过氧化,PR-O,PR-N,PR-2',PR”,烟草硷性及酸性甲壳/溶解。本发明进一步系与生产嵌合DNA序列的方法,其方法为:(a)由适当来源制造第一个DNA序列,此序列在植物体中起动第2个DNA序列之构成性转录;(b)由被病原感染植物组织或由健全或被病原感染植物组织制造DNA库,因此该DNA库含被诱发或被诱发与未被诱发之DNA群体,从第二DNA序列分离,其系包含一个可导引植物发病病因之相关蛋白质,其系选自PR-P,PR-Q,PR-O',SAR8.2a,SAR8.2b,PR-2,胡瓜过氧化,PR-O,PR-N,PR-2',PR",烟草硷性及酸性甲款/溶解,其核 酸序列如申请专利范围第1项,或与该序列本质上同等之编码序列到一个含一个可导引植物发病病因之相关蛋白质如申请专利范围第1项所述;及(c)将步骤(a)之第一个DNA序列与步骤(b)之第二个序列操作性连结是一个对第一个DNA序列正链或一反链的导向。本发明亦包含一种生产植物细胞基因转移或植物组织有能力去再生入一植物,其系存在一个病病一对抗原型,包含转形植物细胞或组织由一个嵌合DNA由上述方法制备。更进一步,本发明亦包含一个监别筛选及培育cDNA组群的方法,其系包含:(a)由诱发与未诱发cDNA群体分离单股cDNA,此两种单股cDNA之极性相反,且来自未诱发群体之cDNA具生物素亲和性标记;(b)杂交上述二种cDNA;(c)以biotin-ariden(生物素一抗生朊)色层分析分离杂交混合物并增殖来自诱发群体之单股cDNA,该cDNA未与来自未诱发群体之cDNA杂交。
申请公布号 TW160908 申请公布日期 1991.06.21
申请号 TW079102510 申请日期 1990.03.30
申请人 诺瓦帝士公司 发明人 丹尼C.亚历山大;佛瑞德烈克米恩斯二世;杰佛里R.史汀森;珍–马克纽豪斯;约翰A.赖亚尔斯;乔治B.佩恩;罗伯特M.古德曼
分类号 A01H1/00 主分类号 A01H1/00
代理机构 代理人 郑自添 台北巿敦化南路二段七十七号八楼
主权项 1﹒一种实质纯cDNAf编码一个可导引植物发病病因之相关蛋白质,其系选自PR─P,PR─Q,PR─O,,SAR8﹒2a,SAR8﹒2b,PR─2,胡瓜过氧化,PR─O,PR─N,PR─2',PR",烟草硷性及酸性甲壳/溶解,有下列之DNA序列:包括所有的DNA序列与上述核酸序列均质及其可以杂交的序列。2﹒一种制备嵌合DNA序列的方法,其方法包含:(a)由适当来源制造第一个DNA序列,此序列在植物体中起动第2个DNA序列之构成性转录;(b)由被病原感染植物组织或由健全或被病原感染植物组织制造DNA库,因此该DNA库含被诱发或被诱发与未被诱发之DNA群体,从第二DNA序列分离,其系包含一个可导引植物发病病因之相关蛋白质,其系选自PR─P,PR─O'PR─0',SAR8﹒2",SAR8﹒2b,PR╮@w2,胡瓜过氧化,PR─O,PR─h',PR─2,,PR",烟草硷性及酸性甲壳/溶解,其核酸序列如申请专利翩@d围第1项,或与该序列本质上同等之编码序列到一个含一个可鴃@氻瑒茠奏o病病因之相关蛋白质如申请专利范围第1项所述;及﹛@]c)将步骤(a)之第一个DNA序列与步骤(b)之第二个均@C操作性连结是一个对第一个DNA序列正链或一反链的导向﹛@C3﹒依申请专利范围第2项之方法,其中第一DNA序列为异源。4﹒依申请专利范围第3项之方法,其中第一DNA序列为烟草核酮糖二磷酸羧化(Rusrsco)小亚单位之起动基因。5﹒依申请专利范围第3项之方法,其中第一DNA序列含双重CaMV35S起动基因。6﹒依申请专利范围第2项之方法,其中之植物组织被导引至系统获得抗病力或由使用生物导引剂独得区部的抗病力。7﹒依申请专利范围第2项之方法,其中第一与第二DNA序列之连结在第二DNA序列对于第一DNA序列之定向为第一DNA序列起动第二DNA序列正链之转录方式进行。8﹒依申请专利范围第2项之方法,其中第一与第二DNA序列之连结在第二DNA序列对于第一DNA序列之定向为第一DNA序列起动第二DNA序列反链之转录方式进行。9﹒一种制备嵌合DNA序列的方法,其方法包含(a)由适当来源制造第一个DNA序列,此序列在植物体中起动第2个DNA序列之构成性转录;(b)由被病原感染植物组织或由健全或被病原感染植物组织制造DNA库,因此该DNA库含被诱发或被诱发与未被诱发之DNA群体,从第二DNA序列分离,其系编码一个可导引植物发病病因之相关蛋白质,其系选自PR─P,PR─O'PR─0',SAR8﹒2a,SAR8﹒2b1PR─2,胡瓜过氧化,PR─O,PR─h',PR─2,,PR",烟草硷性及酸性甲款/溶解,其核酸序列如申请专利范围第1项,或与该序列本质上同等之编码序列到一个含一个可导引植物发病病因之相关蛋白质如申请专利范围第1项所述;及(C)连接步骤(a)之第一个DNA序列与步骤(b)的第二个DNA序列在一个可操作的方法,这样第一个DNA序列可促进第二个DNA序列的转录。10﹒基因转移植物细胞或植物细胞组织之制造方法,此植物细胞或组织具有再生为表现抗病性表型之植物体;其方法包括以由第一DNA序列与第二DNA序列组成之嵌合DNA序列转化植物细胞或植物组织,其中第一DNA序列在植物体中起动第二DNA序列之构成性转录,第二DNA序列含诱导性植物病原因相关白质其系选自PR─P,PR─Q,PR─O'﹒SA╮@遉楚O2a,SAR8﹒2b,PR─2,胡瓜过氧化,P╮@遉wO,PR─N,PR─2',PR",烟草硷性及酸性甲款@t/溶解之编码序列,其核甘酸序列如申请专利范围第1项﹛@A或与该序列本质上同等之编码序列到一个含一个可导引植物窗@o病病因之相关蛋白质如申请专利范围第1项所述,上述的第丑@GDNA序列与第一DNA序列正取向或负取向。11﹒依申请专利范围第10项之基因转移植物细胞或植物细胞组织之制造方法,其中植物细胞或植物组织为植物胚胎或植物全株之一部分。12﹒表现抗病性表型基因转移植物之制造方法,包括由申请专利范围第10项制备方法之转化植物细胞或植物组织再生植物全珠。13﹒依申请专利范围第10项至第12项之任一方法,其中之转化以使用申请专利范围第2项至第9项之任一嵌合DNA序列进行。14﹒具抗病性表型植物之制造方法,包括以含申请专利范围第2项制备方法之第一DNA序列之嵌合DNA序列转化植物细胞或组织。15﹒依申请专利范围第14项之方法,其中之嵌合DNA序列再含第二DNA序列,此序列为植物选择性标记基因。16﹒CDNA群体之监别筛选与强化之方法,包含:(a)由被诱导与未被诱导群体提供单股cDNA,此来自被诱导与未被诱导群体之单股cDNA具相反DNA极性,且来自未被诱导群体之单股cDNA具生物素亲和性标记"(6)步骤(a)之部@璇諲牶隃牉s体互相杂交:(c)以Diotin─arid╮@鞥鬖熉h分析分离步骤(b)之交混合液,以强化未与未被诱鴃@伓s体cDNA杂交之被诱导群体单股cDNA。17﹒一种编码抗病性蛋白贸cDNA之选殖方法,包括:(a)使用生物诱导剂使组织诱导成系统性获得抗性或局部性获得抗性;(b)分离编码抗病性蛋白贺之cDNA系。
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