人胚肾293细胞亚克隆细胞株

摘要

一种用于生产重组腺病毒制品的人胚肾293细胞亚克隆细胞株，该细胞株是由ATCC 293细胞经亚克隆方法制得，它含有人三磷酸甘油醛脱氢(human glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase，GAPD)，该细胞株由下列方法培养制得：a、将ATCC293细胞(P32)复苏后进行细胞扩增传代至第33代次(P33)，然后将P33细胞悬液用FACS流式细胞仪进行亚克隆；b、用2个96孔板，每孔中0.2ml培养基中放置一个细胞，在36～38℃、3～6％CO₂条件下培养6～10天；c、挑选出细胞形态均一、生长良好的、已达到不低于60％铺满生长的克隆；d、重复上述步骤四次，最后挑选出1个亚克隆的细胞柱(P37)，继续培养扩增并制成原代细胞库(P38)，置于-80℃冻存；e、以原代细胞库(P38)为基础制备主代细胞库及工作细胞库。本发明应用基因工程技术和分子克隆技术，使其具有明显增强细胞的贴壁生长的功能和细胞生长倍增时间短的优点。

主权项

1.一种用于生产重组腺病毒制品的人胚肾293细胞亚克隆细胞株，其特征在于所述细胞株经包括下列a、b、c、d步骤的亚克隆方法制得：a、将ATCC 293细胞复苏后进行细胞扩增传代至第2代，然后将第2代细胞悬液用FACS流式细胞仪进行亚克隆；b、用2个96孔板，每孔中0.2ml培养基中放置一个细胞，在36～38℃、3-6％CO2条件下培养6～10天；c、挑选出细胞形态均一、生长良好的、已达到不低于60％铺满生长的克隆；d、重复上述步骤四次，最后挑选出1个亚克隆的细胞株，继续培养扩增并制成原代细胞库，置于-80°冻存，以此原代细胞库为基础制备主代细胞库及工作细胞库；并且所述亚克隆细胞株的细胞能使腺病毒或重组腺病毒生长和繁殖，且含有独特丰富的具有如下核苷酸残基序列的人三磷酸甘油醛脱氢酶： 1 ctctctgctc ctcctgttcg acagtcagcc gcatcttctt ttgcgtcgcc agccgagcca 61 catcgctcag acaccatggg gaaggtgaag gtcggagtca acggatttgg tcgtattggg 121 cgcctggtca ccagggctgc ttttaactct ggtaaagtgg atattgttgc catcaatgac 181 cccttcattg acctcaacta catggtttac atgttccaat atgattccac ccatggcaaa 241 ttccatggca ccgtcaaggc tgagaacggg aagcttgtca tcaatggaaa tcccatcacc 301 atcttccagg agcgagatcc ctccaaaatc aagtggggcg atgctggcgc tgagtacgtc 361 gtggagtcca ctggcgtctt caccaccatg gagaaggctg gggctcattt gcagggggga 421 gccaaaaggg tcatcatctc tgccccctct gctgatgccc ccatgttcgt catgggtgtg 481 aaccatgaga agtatgacaa cagcctcaag atcatcagca atgcctcctg caccaccaac 541 tgcttagcac ccctggccaa ggtcatccat gacaactttg gtatcgtgga aggactcatg 601 accacagtcc atgccatcac tgccacccag aagactgtgg atggcccctc cgggaaactg 661 tggcgtgatg gccgcggggc tctccagaac atcatccctg cctctactgg cgctgccaag 721 gctgtgggca aggtcatccc tgagctgaac gggaagctca ctggcatggc cttccgtgtc 781 cccactgcca acgtgtcagt ggtggacctg acctgccgtc tagaaaaacc tgccaaatat 841 gatgacatca agaaggtggt gaagcaggcg tcggagggcc ccctcaaggg catcctgggc 901 tacactgagc accaggtggt ctcctctgac ttcaacagcg acacccactc ctccaccttt 961 gacgctgggg ctggcattgc cctcaacgac cactttgtca agctcatttc ctggtatgac1021 aacgaatttg gctacagcaa cagggtggtg gacctcatgg cccacatggc ctccaaggag1081 taagacccct ggaccaccag ccccagcaag agcacaagag gaagagagag accctcactg1141 ctggggagtc cctgccacac tcagtccccc accacactga atctcccctc ctcacagttg1201 ccatgtagac cccttgaaga ggggaggggc ctagggagcc gcaccttgtc atgtaccatc1261 aataaagtac cctgtgctca acc，其中上述序列中76-1083编码三磷酸甘油醛脱氢酶的1-335位氨基酸序列，1261-1266为多聚腺苷酸尾Poly A。