稻曲病菌的实时荧光定量PCR检测试剂盒及其应用

摘要

本发明涉及一种检测稻曲病菌实时荧光定量PCR的试剂盒及其应用。该试剂盒利用荧光探针(Taqman)和正义引物、反义引物和阳性标准品，建立了实时荧光PCR反应体系，可以快速、定量地检测稻曲病菌。适用于对农田环境中(包括土壤中越冬菌量以及稻田浮萍和水稻植株上)稻曲病菌进行实时监测；也可以用于水稻种子带菌检测以及比较稻曲病菌在不同水稻品种中的增殖速度。

主权项

1、一种检测稻曲病菌的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒包括：正义引物UF1、反义引物UR1、Taqman荧光探针、10×PCR buffer、1mmol/LdNTP、25mmol/LMg2+、自制的Taq DNA聚合酶组成，正义引物UF1序列为：5’-GAGGGCACCCGGAACCAG-3’，反义引物UR1序列为：5’-CACTCAGACATGCATTGGAAAACA-3’，扩增片段为77bp，荧光探针UP1序列为：5’FAM-CGCCCGCCGGAGGATACAACCAAA-TAMRA3’，探针5’端标记荧光发射基团FAM，靠近3’端标以荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性由插入ITS区的pUCm-T载体转化大肠杆菌DH5α增殖后提取的质粒DNA，DNA经紫外分光光度计A260定量并10倍梯度稀释。