鉴定小麦高分子量谷蛋白亚基的生物质谱方法

摘要

本发明公开了一种鉴定小麦高分子量谷蛋白亚基的质谱方法，属于生命科学蛋白质组技术领域，特别涉及小麦高分子量谷蛋白亚基分子量的精确鉴定以及基于此技术方法对麦谷蛋白亚基的进一步表征。本发明包括如下步骤：(1)制备小麦高分子量谷蛋白亚基的生物质谱分析样品；(2)在获得高分子量谷蛋白亚基沉淀后，用溶解液溶解高分子量谷蛋白亚基；(3)利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定小麦高分子量谷蛋白亚基。该方法具有样品用量少，提取方法简单，无有毒试剂，分离迅速，分辨率高、检测灵敏度高等特点。

主权项

1.一种鉴定小麦高分子量谷蛋白亚基的生物质谱方法，包括如下步骤：(1)在制备小麦高分子量谷蛋白亚基的生物质谱分析样品时，先用35-45％的丙酮沉淀蛋白提取液2-4小时，离心后取沉淀，即为高分子量谷蛋白亚基；(2)在获得高分子量谷蛋白亚基沉淀后，用溶解液溶解高分子量谷蛋白亚基，溶解液的配比为：以溶解液体积为计量基准，溶解液中乙腈溶液的体积为溶解液体积的25-35％，TFA所占的体积为溶解液体积的0.4％，其余为高纯水，用溶解液溶解高分子量谷蛋白亚基的溶解时间为1小时；(3)利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定小麦高分子量谷蛋白亚基时，基质选用芥子酸SA即3，5-Dimethexycinnamic acid，3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸，用10mg基质溶于1ml50％乙腈+0.05％TFA中，标样选用Albumin，66431.08Da，0.1％TFA溶解，分子量的测定采用线性模式，分子量范围10000-100000，点样采用混合上样法，基质1μl，样品0.1μl。