发明名称 |
血管生成抑制因子的制备方法 |
摘要 |
本发明提供的血管生成抑制因子的制备方法,先将赤魟软骨粉碎,再经抽提、粗分、纯化,最后脱盐,冷冻干燥,获得赤魟软骨血管生成抑制因子,简写为DCAIF-I其中纯化采用Hitrap DEAEFF离子交换柱层析、Superdex 75 10/300 GL柱层析、Shim-packVP-ODSHPLC柱层析。本发明所提供的血管生成抑制因子的制备方法,提出了一条从赤魟软骨中提取血管生成抑制因子的方法,且所制得的DCAIF-I经试验能有效抑制血管生成,且有一定的浓度依赖性。该制备方法是一种有效、优化的从赤魟软骨中提取血管生成抑制因子的方法。 |
申请公布号 |
CN101200496A |
申请公布日期 |
2008.06.18 |
申请号 |
CN200610155255.0 |
申请日期 |
2006.12.12 |
申请人 |
浙江海洋学院 |
发明人 |
罗红宇;余新威 |
分类号 |
C07K14/475(2006.01);A61K35/60(2006.01) |
主分类号 |
C07K14/475(2006.01) |
代理机构 |
舟山固浚专利事务所 |
代理人 |
范荣新 |
主权项 |
1.一种血管生成抑制因子的制备方法,其特征是先将赤魟软骨粉碎,再经抽提、粗分、纯化,最后脱盐,冷冻干燥,获得赤魟软骨血管生成抑制因子,其英文缩写名记为DCAIF-I,其中抽提是:先将粉碎的赤魟软骨按1∶4-6的比例放置于抽提液中,该比例为重量与体积比,单位是g∶mL,所说抽提液中含0.05-0.1mol/L的MES、重量/体积百分比为0.02%的EDTA和1.0-2.0mol/L的盐酸胍,随后将pH值调至5.4-6.2,于15-30℃下振荡72h,再于4℃下,10000r/min离心,弃残渣,得上清液为赤魟软骨抽提液;粗分是:先将赤魟软骨抽提液经超滤获取分子量在3-200KD的赤魟软骨血管生成抑制因子粗提液,再将赤魟软骨血管生成抑制因子粗提液用丙酮作分级沉淀,获得的沉淀以pH值为7.0-7.6、浓度为0.02mol/L的Tris-HCl缓冲溶液进行透析,再经冷冻干燥获得赤魟软骨血管生成抑制因子粗制品;纯化是:取血管生成抑制因子粗制品先用Hitrap 26/10 Desalting柱进行脱盐,再用Hitrap DEAE FF离子交换柱进行层析,获得10个明显的分离峰,收集第1峰;再用Superdex75 10/300GL柱进行层析,获得4个明显的分离峰,收集第1峰;再用Shim-pack VP-ODSHPLC柱进行层析,获得3个明显的分离峰,收集第1峰。 |
地址 |
316004浙江省舟山市定海区文化路105号 |