一种生产生物工程化形式的组织型纤溶酶原激活因子的方法

摘要

本发明涉及用于生产可溶形式的人组织型纤溶酶原激活因子变体的重组方法。在该变体中，内源的组织型纤溶酶原激活因子的103位苏氨酸被天门冬酰胺替换，以出现新的糖基化位点。内源的组织型纤溶酶原激活因子117位的天门冬酰胺被谷氨酰胺替换，从而除去了N连接糖基化位点。在296－299位，赖氨酸、组氨酸、精氨酸和精氨酸被四个丙氨酸替换。本发明还涉及编码组织型纤溶酶原激活因子的核酸序列的从头合成，将构建的核酸序列转化进感受态细菌并将其亚克隆进哺乳动物表达载体以表达期望的蛋白质。包括与目的基因结合的控制元件的DNA构建体已被公开。在本发明中的重组人组织型纤溶酶原激活因子、及其盐和功能性衍生物可以构成治疗心脏病发作和中风患者的药物组合物的活性成分。这些组合物是本发明的另一个方面。

主权项

1.一种制备在体内具有生物活性的组织型纤溶酶原激活因子的方法，包括以下步骤：(a)在合适的营养条件下培养用分离的DNA序列转化或转染的宿主细胞，所述DNA序列选自(i)SEQ ID No.1和SEQ ID No.2中列出的DNA序列，或(ii)与(i)和(ii)中定义的DNA序列或它们的互补链在严紧条件下杂交的DNA序列；(b)从中分离所述重组组织型纤溶酶原激活因子产物。