一种同时检测19种喹诺酮类药物的HPLC－ESI－MS/MS测定方法

摘要

一种同时检测19种喹诺酮类药物的HPLC－ESI－MS/MS测定方法，属于抗生素类药物分折技术领域。本发明包括样品处理、液相分离、质谱检测三个步骤，对组织液中19种喹诺酮类抗生素进行正离子MRM扫描，以诺氟沙星－D5为内标，采用C18色谱柱分离，以含甲酸的水－甲醇为流动相作梯度洗脱，对洗脱液进行质谱检测；其特点为根据样品的实际情况和对检测灵敏度的不同要求，采用有机溶剂提取方法进行样品的预处理，以诺氟沙星－D5为内标，采用C18色谱柱，以含甲酸的水－甲醇为流动相作梯度洗脱。本方法前处理过程快速简便，检测结果可靠灵敏，适用于动物性食品中喹诺酮类药物残留的分析检测。

主权项

1、一种同时检测19种喹诺酮类药物的HPLC-ESI-MS/MS测定方法，包括样品处理、液相分离、质谱检测三个步骤，其特征在于对组织液中19种喹诺酮类抗生素进行正离子MRM扫描，以诺氟沙星-D5为内标，采用C18色谱柱分离，以含甲酸的水-甲醇为流动相作梯度洗脱，对洗脱液进行质谱检测；(1)标准溶液的配制分别称取恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氟甲喹、恶喹酸、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、丹诺沙星、氟罗沙星、马波沙星、伊诺沙星、奥比沙星、培氟沙星、萘啶酸、吡哌酸、洛美沙星、西诺沙星19种标准品10mg，分别溶解于甲醇定容至10mL，即为1mg/mL的标准贮备液；分别量取适量19种标准贮备液，配制19种喹诺酮类药物的混合标准工作液10μg/mL；将混合标准工作液用甲醇配制成0.3ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL和50ng/mL的标准溶液，HPLC-ESI-MS/MS测定，以各组分的色谱峰面积对浓度作线性回归，得定量标准曲线；(2)样品处理：称取均质的2.00±0.02g空白鸡或鱼肌肉组织置于50mL离心管中，添加适量的标准溶液，旋涡混匀，避光静置15min后，加入10mL乙腈进行提取，涡动15min，3500r/min离心5min，过滤；残留组织用10mL乙腈重复提取一次，合并上清液，用氮气吹干，然后加入1.0mL 30％甲醇溶液溶解吹干物，0.45μm滤膜过滤，作为待测组织液；(3)液相分离：色谱柱：C18反相色谱柱150×2.1mm i.d.3μm；流动相：0.1％甲酸水溶液-甲醇混合液，梯度洗脱条件：0～1min 0.1％甲酸水溶液-甲醇的体积比为90∶10，1～4min 0.1％甲酸水溶液-甲醇的体积比为90～10∶10～90，4～8min 0.1％甲酸水溶液-甲醇的体积比为10∶90，8～8.5min 0.1％甲酸水溶液-甲醇的体积比为10～90∶90～10，8.5～11min 0.1％甲酸水溶液-甲醇的体积比为90∶10；流速：0.2mL/min；进样量：25μL；柱温：20℃；(4)质谱检测：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多级反应检测；电喷雾毛细管电压：4.2kV；毛细管温度：350℃；辅助气体流速：5L/h；鞘气体流速：20L/h；倍增器电压：920V二级碰撞气：氦气。