复合糖类的制备方法

摘要

一种利用下述酶源制备糖核苷酸类的方法：a)一种任选地处理过的能从核苷酸前体产生NTP的微生物的培养物，和b)一种任选地处理过的能从糖和NTP产生糖核苷酸的微生物的培养物；一种利用下述酶源产生复合糖类的方法：上述的培养物a)和b)，和c)一种任选地处理过的能从糖核苷酸和复合糖前体产生复合糖的微生物，动物细胞或昆虫细胞的培养物；一种利用下述酶源产生复合糖类的方法：一种任选地处理过的能从糖核苷酸和复合糖前体产生复合糖的微生物，动物细胞或昆虫细胞的培养物；一种利用下述酶源产生N-乙酰基葡糖胺-1-磷酸的方法：一种任选地处理过的能从具有潜在的半乳糖激酶活性的微生物的培养物。

主权项

1.一种复合糖类的制备方法，该方法包括：以具有包含载体和DNA片段的重组DNA的微生物、动物细胞或昆虫细胞的培养液或该培养液的处理物作为酶源，所述DNA片段包含编码转移酶的基因，所述转移酶选自葡糖基转移酶、半乳糖基转移酶、N-乙酰葡糖胺基转移酶、N-乙酰半乳糖胺基转移酶、葡糖醛酸基转移酶、甘露糖基转移酶、唾液酸基转移酶和岩藻糖基转移酶；使这些酶源、复合糖类的前体物质和糖核苷酸存在于水溶性介质中，在该水溶性介质中生成并积累复合糖类，以及从该水溶性介质中回收复合糖类，其中所述糖核苷酸是用以下方法制备的：以a)能从核苷酸的前体物质产生下文简称NTP的核苷-5’-三磷酸的微生物的培养液或该培养液的处理物，和b)能从糖和NTP产生糖核苷酸的具有包含载体和DNA片段的重组DNA的微生物的至少一种菌株的培养液或该培养液的处理物作为酶源，所述DNA片段包含至少一种选自以下的基因：下文简称glk的编码葡糖激酶的基因，下文简称pgm的编码磷酸葡糖变位酶的基因，下文简称galU的编码葡萄糖-1-磷酸尿苷酰基转移酶的基因，下文简称ppa的编码焦磷酸酶的基因，编码尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶的基因，下文简称galK的编码半乳糖激酶的基因，下文简称galT的半乳糖-1-磷酸尿苷酰基转移酶的基因，下文简称glmU的编码N-乙酰葡糖胺-1-磷酸尿苷酰基转移酶的基因，下文简称pfkB的编码磷酸果糖激酶的基因，编码葡糖胺-1-磷酸乙酰转移酶的基因，下文简称glmM的编码磷酸葡糖胺变位酶的基因，编码UDP-GlcNAc 4-差向异构酶的基因，下文简称manB的编码磷酸甘露糖变位酶的基因，下文简称manC的编码甘露糖-1-磷酸鸟苷酰基转移酶的基因，下文简称gmd的编码GDP-4，6-甘露糖脱水酶，下文简称wcaG的编码GDP-4-酮基-6-脱氧甘露糖差向异构酶/还原酶的基因，编码GlcNAc 2-差向异构酶的基因，下文简称neuA的编码CMP-NeuAc合成酶的基因，下文简称nanA的编码NeuAc醛缩酶的基因，下文简称neuB的编码NeuAc合成酶的基因，以及下文简称pyrG的编码CTP合成酶的基因；使这些酶源，核苷酸的前体物质以及糖存在于水溶性介质中，在该水溶性介质中生成并积累糖核苷酸；以及从该水溶性介质中回收糖核苷酸。