荧光标记细胞凝集素探针赤潮生物检测试剂盒及其检测方法

摘要

荧光标记细胞凝集素探针赤潮生物检测试剂盒及其检测方法，涉及一种细胞凝集素探针。设有组份I、II、III，I为细胞凝集素探针体系，含有n种荧光标记的细胞凝集素探针，采用磷酸缓冲溶液配置；II为灭菌过滤人工海水或磷酸缓冲溶液配置，配套提供佩克溶液为乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒，用于细胞分离；III为样品固定体系，选自鲁格氏碘液、多聚甲醛和戊二醛。其步骤为培养实验用藻；固定细胞凝集素的配置和藻细胞；加佩克溶液至细胞培养物中，细胞整体混入荧光标记的细胞凝集素探针，加磷酸缓冲溶液和佩克溶液，悬浮沉淀，用双链DNA荧光染料进行复染、观察；在定性染色下进行估计，对每一种染色强度染色细胞计数，计算荧光染色结合的百分率。

主权项

1、荧光标记细胞凝集素探针赤潮生物检测试剂盒，其特征在于设有盒体和组份I、组份II、组份III，组份I、组份II和组份III设于盒体内；组份I为细胞凝集素的探针体系，细胞凝集素的探针体系含有n种荧光标记的细胞凝集素探针，n≥1，体积为500～1000μL×n，各探针的浓度为50～100μg/ml，采用磷酸缓冲溶液配置，含有0.5％～1.5％的叠氮化钠，组分I含有14种异硫氰酸荧光素标记的细胞凝集素探针体系：ConA，DBA，PNA，RCA120，SBA，UEA I，WGA，GSL I，LCA，PHA-E，PHA-L，PSA，SJA，琥珀酰化麦胚凝集素；组分II为反应缓冲体系，提供体积为100～300mL，反应缓冲体系为灭菌过滤的人工海水配置，盐度为25～30，pH为7.5～8.5，或者为磷酸缓冲溶液PBS，浓度为40～60mM，pH为7.5～8.5，配套提供佩克溶液为乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒，用于细胞分离，浓度为70％～90％；组分III为样品固定体系，提供体积为100～400mL，样品固定体系选自鲁格氏碘液、多聚甲醛和戊二醛中的一种，鲁格氏碘液的浓度为10％～20％，鲁格氏碘液的终浓度为0.5％～1.5％，多聚甲醛的浓度为10％～20％，多聚甲醛的终浓度为0.5％～1.5％，戊二醛的浓度为20％～25％，戊二醛的终浓度为1.0％～2.5％。