表达嗜热毛壳菌基因cbh3的毕赤酵母工程菌株

摘要

本发明是一种表达嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)热稳定外切－β－1，4－葡聚糖酶基因cbh3的毕赤酵母工程菌Pichia pastoris GS－CBH3－27。通过RT－PCR及RACE方法从嗜热毛壳菌获得外切－β－1，4－葡聚糖酶基因cbh3，然后将得到的外切－β－1，4－葡聚糖酶基因cbh3表达载体pPIC9K/cbh3导入到毕赤酵母GS115中，从中筛选出了表达外切－β－1，4－葡聚糖酶的酵母工程菌GS－CBH3－27。该工程菌外切－β－1，4－葡聚糖酶表达量高达1.7mg/mL，酶在60℃是稳定的，在70℃保温60min，仍有60％的活性，80℃的半衰期为10min，具热稳定性，用于转化植物纤维素的生物降解，具有较高经济价值和社会价值。

主权项

1、一种表达嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)热稳定外切-β-1，4-葡聚糖酶基因cbh3的酵母工程菌株GS-CBH3-27，其特征在于，通过RT-PCR及RACE方法从嗜热毛壳菌获得热稳定外切-β-1，4-葡聚糖酶基因cbh3，将该基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K，获得表达重组质粒pPIC9K/cbh3，转化毕赤酵母GS115，从中筛选出表达热稳定外切-β-1，4-葡聚糖酶基因cbh3的毕赤酵母工程菌株GS-CBH3-27，该菌用于植物纤维素的生物降解。